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微生物学
0 次观看 • 2:42 分钟 • February 26th, 2026
从一只感染了耐药性细菌菌株的安乐死小鼠开始，该模型可模拟慢性肠道感染。
暴露腹腔以暴露盲肠和脾脏。
采集代表细菌定植肠道和全身位点的盲肠和脾脏组织。
将每份组织放入含有缓冲液和钢珠的独立管中。
通过快速振荡试管，使钢珠与组织碰撞，从而将组织破碎并释放细菌进入悬浮液中。
用缓冲液对匀浆进行连续稀释，以降低细菌浓度。
将各稀释度的等分试样接种至添加了抗生素的营养琼脂平板，以选择性分离抗生素抗性细菌。
孵育平板，使存活的细菌生长成菌落。
计数菌落以估算每克组织中可存活细菌的数量，并比较盲肠和脾脏中的细菌载量。
首先，准备2毫升安全锁圆底微量离心管，向每管中加入1毫升无菌磷酸盐缓冲液（PBS）和一颗已灭菌的不锈钢珠。在采集组织前，预先称量各管的质量。
处死小鼠后，切除其盲肠和脾脏组织，确保将每只小鼠的组织分别收集到不同的离心管中。称量每个离心管的重量，以确定组织重量。
使用混匀研磨仪以30赫兹的频率均质组织15分钟。然后，将900微升PBS转移至96孔2毫升大块板的每个孔中。用移液器将100微升组织匀浆加入第一孔，并充分混匀。
通过向后续孔中加入100微升进行连续稀释，直至获得10的负6次方稀释度。将每种稀释液各10微升接种于含链霉素的LB琼脂平板上，每个稀释度设三个复孔。然后，计数平均菌落形成单位，并按照文本方案中所述方法确定每克组织的菌落形成单位数。