FFPE肿瘤组织宏观解剖：从未经染色的标本中获取特定肿瘤组织的技术

开始宏观解剖时，取一张载有组织样本的玻片。另外，取另一张载有相同组织样本的参考玻片，使用苏木精和伊红进行 H&E 染色。

在正常细胞中，苏木精使核酸呈现蓝色，而伊红复染使细胞蛋白质呈粉红色。细胞核的深蓝色有助于区分癌细胞与正常细胞。

将苏木精-伊红（H&E）染色切片与未染色切片重叠，以对齐组织样本。在H&E染色切片上定位含有肿瘤细胞的区域，并在未染色切片上标记相应位置。

从未染色的载玻片上刮取所需组织。使用湿润的移液器吸头收集刮下的组织，以确保组织样本易于转移。将组织转移至含有裂解缓冲液的离心管中。裂解缓冲液的组分可消化组织，从而释放细胞内的各种组分。

使用适当的蛋白酶处理裂解液，并在高温下孵育。蛋白酶可切割污染的DNase，从而保护DNA免受降解。将含有DNA的组织裂解液储存起来，用于后续分析。

根据相应的苏木精和伊红（H&E）染色切片，确定肿瘤区域中最适合进行大体解剖的癌组织。随后，依据已标记的切片进行癌组织的大体解剖。取一把洁净的刀片，轻轻将癌组织从玻片上刮下，尽量保持组织完整。使用移液器吸头将刮下的组织转移至裂解缓冲液小管中。

用其余的载玻片重复此过程。当所有组织都放入离心管后，使用枪头确保组织完全浸没，且未粘附在管壁上。向管中加入 20 µL 的与枯草杆菌蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶，轻轻弹动混匀。将离心管置于 55 °C 的加热模块中，孵育至少 4 小时或过夜，并在 2 小时后轻轻涡旋混匀。