福尔马林固定石蜡包埋 （FFPE） 组织保存:一种研究组织形态的方法

- 首先，将组织切片放在浸泡有 PBS 的滤纸上，通过平衡渗透压来防止细胞收缩或肿胀。将组织转移到组织盒中。关闭盒并将其置于中性缓冲福尔马林、NBF 溶液中。NBF 含有甲醛，甲醛与氨基酸的氨基结合，并防止甲酸形成，甲酸使组织着色。将盒在低温下放置过夜，以防止核酸降解并固定组织。用多次酒精洗涤使组织脱水。

将其放入液体石蜡中，然后将其向下压至模具底部。卸下重物，将组织盒的底部放在组织上。将液体石蜡倒在组件上。让设置在冷板上凝固。石蜡不溶于水，进入脱水组织后会变硬并有助于切片。将组织块转移到切片机上。在载玻片上切割并收集组织的薄片。如果切片太厚，氧气和其他营养物质就无法扩散到切片上，从而产生假的坏死梯度。如果截面太薄，则它往往会卷曲。该方案视频检查了肺癌 FFPE 组织的生物标志物表达和细胞活力。

- 要开始固定所需的切片，请使用镊子小心地将其转移到一个 10 厘米长的板中，该板装有装满 2 至 3 毫升 PBS 的浸泡滤纸，然后让它漂浮。然后用一对镊子取出滤纸，将其放入组织膜盒中。将滤纸转移到组织膜盒中。在组织切片上加入一滴稀释的苏木精，以标记切片的位置，以便进行后续步骤。关闭盒并将其转移到 4% 中性缓冲福尔马林溶液中，并在 4 摄氏度下放置过夜。按照方案中的说明清洗和处理膜盒后，打开 histo 膜盒并使用手术刀小心地从滤纸上提起固定切片。丢弃滤纸，将切片转移到含有液体石蜡的模具中。

使用平重物将组织压在包埋模具的底部，以确保切片均匀。将组织膜盒的底部放在模具顶部，在其顶部加入液体石蜡，让模具在冷板上冷却 30 分钟。之后，将冷却的模具与石蜡块分开。使用切片机制备 FFPE 组织切片块的 4 微米薄片。修剪掉组织周围多余的石蜡。为了获得整个组织的均匀切片，调整块的角度，使块的表面相对于刀片水平定向。使用细刷，从载玻片的上部开始收集石蜡包埋组织切片的连续组织切片。继续收集较深组织层的部分到中间，然后是载玻片的底部。

- 从每个组织切片的不同层到目标载玻片的切片收集，以便能够捕获潜在的培养诱导的活力梯度、细胞迁移或生物标志物表达。

- 收集切片后，按照协议中的说明继续进行处理和进一步分析。