利用DAPI染色进行细胞死亡筛选：一种快速筛选电离辐射诱导癌细胞系克隆性细胞死亡的方法

暴露于电离辐射（如X射线）可导致DNA损伤，最终引起细胞死亡。为了筛选电离辐射对细胞死亡特征的影响，首先取一个培养皿，其中含有贴壁生长的癌细胞，且细胞位于盖玻片表面。

用X射线照射培养皿，持续所需时间。该处理可导致细胞内DNA损伤。随后，吸除培养皿中的废弃培养基，并加入适当的固定剂。该溶液可穿透细胞，使细胞组分在后续染色步骤中保持固定位置。

弃去固定液。将含有经X射线处理的细胞的盖玻片从培养皿中取出。将盖玻片翻转，使其细胞面直接接触载玻片表面预先滴加的一滴DAPI染液，确保细胞与DAPI充分接触。

DAPI 分子进入细胞核并与 DNA 的富含 A-T 的位点结合。现在在荧光显微镜下观察细胞，细胞核呈蓝色，并表现出清晰的形态特征。

细胞核凝聚且呈片段化的细胞提示发生凋亡，即程序性细胞死亡。具有多叶状细胞核的细胞表明其正在经历有丝分裂灾难。细胞核扁平并呈现多个明亮斑点的细胞则提示其正在发生衰老。

从培养箱中取出细胞，吸除培养皿中的培养基。用剪刀将1,000微升移液器吸头的尖端剪去约5毫米，然后用其向培养皿中加入1毫升固定液。

沿培养皿壁加入固定液，以尽量减少对细胞的损伤。然后将该培养皿转移至方形培养皿中，轻轻振荡，使固定液均匀覆盖盖玻片。随后，在室温下孵育10分钟。

从培养皿中吸去固定液。随后，沿培养皿壁加入2毫升PBS，再吸去PBS。为进行DAPI染色，取5微升DAPI染色试剂滴加到玻璃载片上。然后用解剖刀从培养皿中取出盖玻片，并用纸巾轻触盖玻片边缘，吸去盖玻片上多余的PBS。

现在，将盖玻片细胞面朝下倒置在载玻片上滴加的DAPI染色试剂液滴中，使细胞与DAPI染色试剂接触。最后，使用配备DAPI滤光片的荧光显微镜观察染色后的细胞。