使用 DAPI 染色进行细胞死亡筛查:一种在癌细胞系中快速筛查 IR 诱导的克隆形成细胞死亡的方法

暴露于 X 射线等电离辐射会导致 DNA 损伤，最终导致细胞死亡。要筛选电离辐射对细胞死亡谱的影响，首先取一个含有贴壁癌细胞的培养皿，放置在盖玻片表面上。

用 X 射线照射培养皿所需的持续时间。这种治疗会导致细胞内的 DNA 损伤。接下来，从培养皿中吸出用过的培养基并添加合适的固定剂。该溶液渗透细胞并在随后的染色步骤中将细胞成分锁定到位。

丢弃固定溶液。从培养皿中取出含有 X 射线处理细胞的盖玻片。翻转盖玻片并将其放在载玻片表面上，上面有一滴DAPI染色剂，使细胞与DAPI直接接触。

DAPI 分子进入细胞核并与富含 A-T 的 DNA 位点结合。现在，在荧光显微镜下观察细胞。细胞核呈蓝色并表现出不同的形态。

显示浓缩和碎片细胞核的细胞表明细胞死亡，即程序性细胞死亡。其他显示多叶细胞核的细胞代表细胞正在经历有丝分裂灾难。那些扁平的细胞核显示出多个亮点的细胞提示细胞正在衰老。

培养箱中取出细胞，从培养皿中吸出培养基。用剪刀将1,000微升微量移液器吸头的尖端从末端剪下约5毫米，然后用它向培养皿中加入1毫升固定溶液。

沿着培养皿壁涂抹固定溶液，以尽量减少对细胞的损伤。然后，将该培养皿转移到方形培养皿中并轻轻摇晃，使固定溶液均匀分布在盖玻片上。之后，将盘子在室温下孵育 10 分钟。

培养皿中吸出固定溶液。现在，沿着培养皿壁加入 2 毫升 PBS，然后吸出 PBS。要准备 DAPI 染色，请将 5 微升 DAPI 染色试剂添加到载玻片上。然后，用手术刀从培养皿中取出盖玻片，并用纸巾触摸盖玻片的边缘，排出盖玻片上多余的PBS。

现在，将盖玻片倒置在载玻片上的DAPI染色试剂滴上，使细胞暴露于DAPI染色试剂中。最后，在配备DAPI滤光片的荧光显微镜下检查染色细胞。