生物膜干涉技术检测配体和分析物之间的相互作用

要使用生物层干涉测量法 （BLI） 检测配体-分析物相互作用，首先将水合光纤生物传感器固定在 BLI 仪器支架上，设置为所需的程序。

生物传感器尖端涂有用镍-硝基三乙酸 Ni-NTA 基团固定的生物相容性层。将生物传感器尖端浸入缓冲液中。

仪器向生物传感器发射白光，白光从两个界面反射：内部参考层或光学层和生物相容性层。反射光束在不同的光波长下产生相长或相消干涉。光电探测器检测产生的干涉图案。

基线干涉响应测量之后，添加组氨酸标记的配体溶液。组氨酸标签与生物传感器上的镍阳离子结合，将配体固定在尖端。

结合后，发射的白光从光学层反射，生物相容性层用尖端光学厚度增加的配体固定。这增加了反射层之间的距离，导致干涉图案偏移和波长偏移。

清洗吸头，去除未结合的配体。与目标分析物溶液一起孵育。分析物与配体结合，进一步增加尖端的光学厚度，导致波长偏移增加。

将生物传感器尖端置于缓冲液中。记录分析物与固定在尖端上的配体解离过程中的波长偏移。

监测波长偏移随时间的变化有助于研究配体和分析物之间的分子相互作用。

BLItz 机器。确保本机通过本机背面的 USB 数据输出端口连接到计算机。

在计算机上，打开相关软件并单击屏幕左侧的"高级动力学"。在软件中，在每个相应的标题下输入有关实验的所有适当信息。单击"生物传感器类型"，然后从下拉菜单中选择"Ni-NTA"。每个步骤的持续时间可以根据需要从默认更改。为获得最佳结果，初始基线和基线至少使用 30 秒，关联和解离至少使用 120 秒。

PCR 管中取出水合的镍 NTA 生物传感器，并通过将生物传感器的宽部分滑到支架上将其固定到机器上的生物传感器支架上。

将 0.5 毫升黑色微量离心管放入机器的管架中，并将 400 微升 BLI 缓冲液移入其中。关闭机器的盖子，使生物传感器尖端浸没在微量离心管中的缓冲液中。单击软件上的"下一步"开始记录初始基线。

初始基线步骤完成记录后，打开机器盖。将滑块向右移动。将 4 微升透析的 His 标记配体移液到滴架上，然后关闭机器盖，机器将自动开始记录加载步骤。

加载步骤完成记录后，打开机器盖。将滑块向左移动，使管架再次位于黑色箭头的前面。关闭机器的盖子，并确保生物传感器尖端浸入试管支架中试管的 BLI 缓冲液中。机器和软件将自动开始记录基线步骤。

基线步骤完成记录后，打开机器盖。取下滴架并通过移出任何蛋白质并用双去离子水冲洗总共五次来清洁它。最后一次清洗后，使用纸巾擦拭水滴支架的表面。将落架放回机器上。将机器上的滑块向右移动，使滴式支架再次位于黑色箭头的前面。

4 微升透析分析物移液到滴架上，然后关闭机器盖，机器将自动开始记录关联步骤。关联步骤录制完毕后，打开机器盖。将机器上的滑块向右移动，使试管支架再次位于黑色箭头的前面，然后关闭机器的盖子，它将自动开始记录解离步骤。