免疫细胞表型和功能表征的条形码检测

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从含有刺激和固定免疫细胞的测试样品开始。

刺激诱导细胞中特定标志物的表达,而固定则保留表型标志物,包括细胞表面抗原和功能状态标志物,包括细胞因子。

每个样品添加独特的重金属同位素偶联抗体组合。

该技术对多个样品进行独特的条形码,通过重金属同位素的组合来区分每个样品。

抗体与一个共同的表位结合,对样品中的所有细胞进行条形码。

所有带条形码的样品组合在一个试管中,用于下游处理。

添加金属偶联抗体混合物以染色表面抗原。

添加透化缓冲液以增加细胞膜通透性以进行细胞内染色。

添加另一组金属偶联抗体来染色细胞内细胞因子。

条形码可以通过质谱细胞术同时染色和采集混合样品。该技术最大限度地提高了测定效率,改进了表型和功能状态标记物的评估。

要对裂解的固定细胞进行条形码,请从零下80摄氏度的储存中解冻样品,在冰上缓慢解冻。用PBS将10倍条形码烫制缓冲液稀释1至10,并制作足够的缓冲液,每个样品可容纳3毫升。

CSM 填充一个非无菌槽,用 1x 条形码 perm 缓冲液填充一个槽。然后,将 1 毫升冰冷的 CSM 添加到刚解冻的样品中。充分混合,然后转移到相应的预标记聚丙烯簇管中。

现在,取一个 10 微升的样品,并使用自动细胞计数器对细胞进行计数。通过去除多余细胞的体积,使每个簇管中的细胞计数归一化。然后,在室温下以600倍g离心细胞5分钟。用多通道移液器将细胞重悬于 1 毫升 1x 条形码烫手缓冲液中,并在室温下以 600 倍 g 离心 5 分钟。然后,吸出上清液。

按照条形码键上指示的相同顺序将簇管排列在架子上,以便样品与其条形码匹配。通过多通道移液器将 800 微升 1x 条形码 perm 缓冲液添加到簇管中的所有样品中,不要接触细胞沉淀以减少细胞损失。

然后,将带有簇管的架子放在一边。将 20 重钯条形码试剂盒管条从零下 20 摄氏度中取出,并在室温下解冻。加入 100 微升 1x 条形码 perm 缓冲液,充分混合,并将 120 微升重悬的条形码混合物转移到簇管中的相应细胞样品中。

用多通道移液器彻底混合,这样单独条形码的样品之间就不会有交叉污染。在室温下孵育簇管 30 分钟,让条形码标记细胞。30分钟后,在室温下以600倍g离心样品5分钟。吸出上清液。然后,将它们重悬于 1 毫升 CSM 中。随后,离心并再次重悬于 CSM 中。

然后,在室温下以600倍g离心5分钟,并吸出上清液。使用单个移液器并使用相同的吸头,将所有细胞沉淀和约 70 至 80 微升残留体积转移到一个聚苯乙烯管中。不要弹出移液器吸头。用这个吸头将单个移液器放在一边。

使用多通道移液器和新吸头,向每个原始簇管添加 100 微升 CSM,以最大限度地提高细胞回收率。使用带有搁置吸头的单个移液器,将 100 微升残留体积的所有细胞沉淀转移到同一聚苯乙烯管中。加入 CSM 将聚苯乙烯管加满约 3 毫升。计数并记录合并条码集的单元号。然后,在室温下以600倍g离心5分钟,吸出上清液。在同一天继续对带条形码的样品进行染色。

06:28

样品制备质谱术分析

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Last updated: 4 July 2026