使用微流控设备的基于磁性纳米粒子的免疫测定

以固定在显微镜载物台上的微流体装置为例，该装置包括用于分配试剂的入口、用于流体流动的互连通道和用于吹扫流体的出口。

主通道包含一个中央交错限制，其中包含捕获的聚集铁微粒。

通道与封闭溶液一起孵育，以防止非特异性抗体结合。

流动洗涤缓冲液，去除多余的封闭溶液。

以规定的流速引入免疫复合物悬浮液。免疫复合物由磁性纳米颗粒组成，涂有与一抗结合的抗原，一抗进一步与过氧化物酶偶联的二抗结合。

施加外部磁场，磁化聚集的微粒并将它们转化为用于捕获免疫复合物的磁阱。

引入荧光底物，该底物被过氧化物酶转化为荧光产物并流过捕集器。

使用显微镜比较陷阱前后的荧光，确认免疫复合物的捕获。

使用注射器用蒸馏水填充通道。将设备浸入超声波浴中 10 分钟。然后，清空设备通道内的水，并使用注射器引入 5% 的 BSA 溶液。

5%BSA中制备直径为7.5微米的铁微粒悬浮液。将芯片和微粒悬浮液与封闭溶液在室温下孵育至少1小时。接下来，用注射器针头通过侧通道出口软管将微粒插入芯片中。

垂直放置芯片;然后，以 90 度的两步旋转芯片，使微粒在 5 微米限制内瞄准并压实。用热量密封亚克力设备的所有软管。切断进水软管，直到只剩下几毫米。

清洗缓冲液填充分配针并将其插入切割软管。让溶液滴落，然后将针头连接到设备。从侧通道上切断出口软管，然后连接到注射泵。接下来，对主通道出口软管重复相同的过程，然后将芯片连接到磁铁上。

对于免疫检测，保持洗涤缓冲液以每小时 50 微升的速度流动 10 分钟。用微量移液器从分配针中取出剩余的洗涤缓冲液，并加入 50 微升纳米颗粒悬浮液。以每小时 100 微升的流速流动纳米颗粒悬浮液 7 分钟。然后，将流速更改为每小时 50 微升，并继续流速 15 分钟。

更换分配针，并以相同的速率流动洗涤缓冲液 10 分钟。用微量移液器从分配针中取出剩余的洗涤缓冲液，并加入 100 微升荧光底物。调整底物输入、荧光测量和洗涤步骤的流速和时间参数。

以每小时 50 微升的速度激活荧光底物的输入流 6 分钟。在底物流动停止前 15 秒，打开显微镜的荧光。在基板停止前 10 秒使用显微镜相机的软件开始图像捕获，曝光时间为 1,000 毫秒。

基板清洗停止后立即单击所需流速参数的开始按钮。以每秒一帧的速度进行成像 6 分钟。在所选测量流量停止后立即单击清洗流量的开始按钮。