使用磁性激活细胞分选从小鼠脑脱髓鞘病变中分离小胶质细胞

小鼠大脑的胼胝体中解剖染色的脱髓鞘病变。

这些病变含有表达细胞表面整合素 CD11b 的脑驻留小胶质细胞。

收集组织并加入含有蛋白水解酶和DNase的溶液。

该酶降解细胞外基质，而 DNase 降解游离 DNA。

加入冷缓冲液并通过过滤器过滤悬浮液以去除细胞团块。

心，弃去上清液，并将沉淀的细胞重悬于密度梯度培养基中。

缓冲液和离心机覆盖以收集上层的剩余碎片;完整的细胞沉降在底部。

去除碎片并将细胞重悬于缓冲液中。

添加抗CD11b磁珠以标记小胶质细胞。

将电池加载到包含铁磁球的柱上，该柱放置在磁选机的磁场中。

外部磁场下，珠子结合的小胶质细胞保留在柱中，而未结合的细胞流过。

色谱柱从磁场中取出。添加缓冲液洗脱小胶质细胞。

首先在立体显微镜下显微解剖胼胝体周围被中性染料标记的病变。将解剖的组织以 300 x g 离心 30 秒，以在管底部收集样品。在培养箱中预热酶混合物1和酶混合物2至37摄氏度。然后，将 1,950 微升预热的酶混合物 1 添加到一个样品中，并在 37 摄氏度的培养箱中消解 5 分钟。加入 30 微升预热的酶混合物 2，并轻轻混合。

消化后，将 4 毫升冷 PBS 加入试管中，轻轻摇匀。将组织样品在 4 摄氏度下以 300 x g 离心 10 分钟，并缓慢而完全地吸出上清液。用 1,550 微升冷 PBS 轻轻重悬细胞沉淀。加入 450 微升冷溶液以去除碎屑，并将它们充分混合。

使用 1000 微升移液器用 2 毫升冷 PBS 非常缓慢而轻柔地覆盖混合物。离心，混合物，然后寻找 3 层。使用 1000 微升移液器完全吸出 2 个顶层，并在试管中填充最多 5 毫升的冷加载缓冲液。轻轻倒置管子 3 次。

接下来，离心并抽吸上清液后，用90微升上样缓冲液重悬细胞沉淀，并加入10微升CD11b珠子。充分混合并在 4 摄氏度下孵育 15 分钟。孵育后加入1毫升上样缓冲液，并用1000微升移液器轻轻上下移液来洗涤细胞。

4：00摄氏度下以300×g离心细胞10分钟，并完全吸出上清液以除去未结合的珠子。将细胞重悬于 500 微升上样缓冲液中，并将 MS 色谱柱及其分离器置于磁场中进行正选择。用 500 微升上样缓冲液冲洗色谱柱以保护细胞，并根据制造商的方案确保磁分选的效率。

细胞悬液涂在 MS 色谱柱上，并丢弃含有未标记细胞的流通液。加入 500 微升上样缓冲液洗涤色谱柱，并将其从分离器中取出。将色谱柱放在 15 毫升离心管上，并在色谱柱中加入 1 毫升上样缓冲液。最后，将柱塞推到色谱柱底部以冲洗出磁标记的细胞。