通过机械均质化从小鼠大脑中分离多种细胞类型

首先将组织研磨机组件放在冰上。该装置包括一个研钵和两个不同直径的杵。

冷冻的盐缓冲液倒入研钵中，然后加入小鼠脑组织。

缓冲液维持渗透平衡，保留细胞结构和功能。

使用较小直径的杵以多次轻柔的笔触研磨组织，将组织机械剪切成更小的碎片。

接下来，用较大直径的杵划过，促进组织进一步分解成其组成细胞。

混合物转移到管中并离心。

除去上清液。

加入冷冻盐缓冲液，并涡旋以破坏细胞团块和髓磷脂。

接下来，加入密度梯度培养基和离心机。

由于形状和质量的差异，细胞会沉淀在下层，而碎片和髓磷脂会积聚在顶层。

弃去上清液。

添加合适的溶液以获得多细胞悬浮液以供进一步使用。

对于组织均质化，将 3 毫升预冷的 HBSS 添加到 Dounce 组织研磨机的预冷玻璃砂浆中，并将收获的大脑的一半转移到砂浆中。用杵A轻轻浸渍组织10次，然后用杵B轻轻浸渍10次，并将均质混合物转移到新的15毫升锥形管中。

预冷的HBSS将管填充至10毫升的最终体积以进行离心，并将沉淀重悬于7毫升新鲜HBSS中，然后将样品保持在冰上。为了去除碎屑，向每个消化或均质的样品中加入 3 毫升预冷等渗溶液，并轻轻涡旋样品以确保它们混合均匀。

接下来，离心样品并小心地去除漂浮在溶液表面的白色碎片和髓磷脂盘。丢弃碎片后，从每个管中收集除最后 100 微升外的所有上清液，而不会干扰沉淀。将每个沉淀重悬于 1 毫升 FACS/BL 溶液中，以转移到单独的 1.5 毫升微量离心管中。

用颗粒溶液离心后，重要的是要非常小心地去除碎屑盘和上清液，不要移开细胞沉淀，以避免样品损失。

离心后，小心地从每个管中吸出上清液，并将沉淀重悬于每管 350 微升新鲜 FACS/BL 中。