从小鼠脑中分离单核细胞:一种分离脑驻留单核细胞的密度梯度离心技术

大脑中的单核细胞，包括淋巴细胞和单核细胞，在维持大脑功能和稳态方面发挥着至关重要的作用。

要分离这些单核细胞，首先，取一只用盐水灌注的新鲜收获的小鼠大脑。

灌注可以从血管中去除血液及其成分，从而在后续步骤中分离大脑驻留免疫细胞。

现在，用合适的培养基冲洗大脑以去除粘附的红细胞。冲洗后切碎以获得小组织碎片。

质化组织片段以获得单细胞和细胞片段的悬浮液。

该悬浮液中，然后以适当的体积加入冷冻介质和合适的密度梯度培养基，以形成低密度梯度培养基。

接下来，添加特定体积的高密度渐变介质;高密度渐变介质在底部形成一个单独的层，从而创建不连续的密度梯度。

高速和低温条件下离心悬浮液。单核细胞占据两个密度梯度培养基层之间的界面。

弃含有细胞碎片和髓磷脂的顶层 - 围绕神经细胞轴突的脂肪组织鞘。

界面层转移到装有合适培养基和离心机的新鲜管中。

纯化的单核细胞沉淀为沉淀，可以重悬于缓冲液中以进行进一步分析。

小心地从鼻子到颈部切开颅骨，并将每只动物的大脑从颅盒转移到装有 10 毫升 RPMI 培养基的单独 50 毫升管中。

混合试管以去除粘附的红细胞并通过抽吸去除培养基。向每个试管中加入 10 毫升新鲜培养基，并将大脑转移到单独的 100 毫米培养皿中。

用剃须刀将每个大脑切碎，然后使用塑料移液器将尽可能多的组织从一个培养皿中的 6 毫升培养基转移到冰冷的 7 毫升烧结玻璃均质机中。

杵的"松散"柱塞研磨大脑，然后使用"紧"柱塞将组织带到组织，直到悬浮液均匀。然后，将所得组织浆液倒入预冷的 15 毫升冰锥形管中。

所有样品均质化后，用新鲜培养基将每个管中的体积调整为7毫升，然后将每个组织悬浮液添加到新的冷却15毫升管中，每管含有3毫升100%基底膜基质。

置混合几次，然后使用 3 毫升移液器在每个组织溶液样品下小心缓慢地加入 1 毫升 70% 密度梯度溶液。

通过密度梯度离心分离细胞并去除几乎所有顶层，注意完全去除所有髓磷脂。

界面转移到新的 15 毫升管中，并用新鲜培养基将体积调节至 10 毫升。然后，再次离心样品并除去上清液，然后将沉淀重悬于每管约 100 微升培养基中。

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