在多电极阵列上构建图案化神经元回路

取一个清洁和灭菌的多电极阵列（MEA），这是一种包含微电极的装置，用于获取和传递神经信号。

图案化聚合物模板连接到显微纵器上并将其放置在 MEA 表面上。

在显微镜下，将图案模板与 MEA 的电极对齐，并将其连接以创建模块。

取下显微纵器。

将 MEA 转移到真空室中。将基质溶液添加到钢网中并施加真空以确保均匀的基质涂层。

让基质干燥。

取下模板，并通过将 MEA 暴露在紫外线下对其进行灭菌。

神经元细胞添加到 MEA 的中心，并让细胞附着在基质层上。

接下来，加入生长培养基并孵育。

来自培养基和细胞外基质的营养物质使细胞能够生长和扩展投射，形成相互连接的模式化神经元回路，其信号可以使用 MEA 记录。

首先，通过在自来水下清洗多电极阵列，然后在浓缩酶洗涤剂中进行超声处理来清洁多电极阵列。重复这些步骤三次。然后，在纯蒸馏水中对MEA进行超声处理三次。之后，在引擎盖下，用蒸馏水清洗 MEA，然后用紫外线消毒 30 分钟。

现在，将模板连接到准备好的显微纵器上。在倒置显微镜下，检查并对齐图案结构以匹配 MEA 的电极。然后，使用显微纵器将模板降低到 MEA 表面。安装后，抬起显微纵器。现在，将 MEA 转移到真空室中 15 分钟。然后，在模板上滴一滴 1 毫升的 PDL，并将其放回真空室中 2 个周期，每次 20 分钟。

让 PDL 干燥过夜。第二天，使用镊子从 MEA 上取下 PDMS 模板。最后，对 MEA 进行紫外线消毒 7 分钟。然后他们就准备好进入细胞了。在制备过程中，培养细胞并制备悬浮液，如文本方案所示。重悬所需数量的细胞后，将它们接种在MEA或盖玻片上图案区域的中心，MEA应装载100微升体积，盖玻片可容纳1,000微升。将铺板的细胞孵育 40 分钟。然后，加入电镀介质。

要每 4 天维持一次细胞，请重新添加新鲜补充的生长培养基。第六天或第七天后，模块之间的神经元连接应该开始形成。