从查明的神经元和取食行为的钙信号的同时记录果蝇

该程序的总体目标是通过钙成像监测神经元活动，同时观察摄食行为。这是通过首先将苍蝇插入苍蝇装置来实现的。接下来，解剖苍蝇头以露出大脑。

然后将带有解剖果蝇的果蝇的装置放置在显微镜载物台上。该程序的最后一步是用糖芯刺激 pro Bois。最终，可以获得结果，显示通过钙成像激活已识别的神经元，并通过行为录像与 Probus 扩展相关。

我第一次想到这种方法的想法是在想到在水面上游泳的打啤酒的眼睛。我们啤酒的眼睛裂开了，可以看到水面上方和下方。我的实验的一个棘手点是大脑和 SCU 彼此靠近，但如果它们像啤酒的眼睛一样很好地分开，那么当大脑暴露在卫星中时，我们可以保持 SCU 干燥。

我在 SCU 上方做了一个非常简单的隔板，将干面与宽度处分开，通过熔化侧壁并雕刻成合适的角度和厚度，从 35 毫米猎鹰盘的盖子上塑造一个平台。在平台上钻一个孔以容纳飞头，使口器自由暴露在腔室外部。将移液器人吸头的末端剪成刚好足以容纳苍蝇身体的宽度，然后将吸头粘在平台上。

在 24 摄氏度下饿死一只成年苍蝇 25 小时后。将苍蝇放入 15 毫升塑料管中，使用镊子站在冰上，麻醉果蝇。将苍蝇插入苍蝇的腔室，轻轻地将苍蝇推入，直到它无法移动。

喙的侧面和上方涂抹少量光固化胶水，将近端长鼻或喙的周围部分密封到孔的内边缘，使用睫毛或类似工具小心地涂抹胶水。还要将胶水从苍蝇内部涂抹到头部背面和孔内边缘之间的空间。最后，用最弱的蓝光照明固化胶水，使其足以固化，以避免损坏苍蝇。

为了稳定苍蝇的头部并暴露 SOG 的腹侧部分，请连接一根线以将喙部分抬起。苍蝇就位后，用不含蔗糖的盐水填充平台表面。使用钨刀片和带有锋利尖端的镊子打开头囊以露出 SOG，我们称为锋利的镊子。

Scis 拉链。这是 scis 拉链的演示，从 Kim 湿巾中切割纤维以进行比较。首先在视野中用虹膜剪刀进行，然后在一毫米刻度尺前进行。

首先，使用钨刀片，在后缘切开一个切口。然后用锋利的镊子切开侧面和前缘。用镊子提起切好的角质层并将其取出。

用镊子切开触角和触角神经。然后选择性地去除 SOG 和角质层之间的气袋，以稳定大脑并防止运动伪影。接下来，切开食道末端朝向咽部，末端切开进入 SOG，以消除咽部和大脑之间的连接。

然后在识别并拉出第 16 块肌肉后，分离连接大脑和角质层的任何气管。将苍蝇放在旋转盘共聚焦显微镜的载物台上，然后切换到水浸透镜进行成像。然后使用 491 纳米激发激光聚焦在感兴趣区域，以 122 毫秒的曝光时间为 4 赫兹拍摄单个光学切片。

使用带有小日式灯芯的注射器针头。她是不是把纸的尖端伸出来，把蔗糖给苍蝇吃？将一小滴蔗糖溶液排到吸芯上，然后用连接到针头的注射器通过一根软管吸出，使用纵杆纵器固定针头。

将浸湿的 washy 纸芯涂抹在探针的尖端，但只能片刻。避免饱腹。使用连接到解剖显微镜的 CCD 相机监测 PROBUS 延伸响应或 PER 行为，同时进行钙成像，并确保在解剖后一小时内收集数据。

这里显示的是含有 100 毫摩尔蔗糖的 WIC 对刺激的典型 prob Bois 延伸反应。使用 491 纳米激光对 G CAMP 荧光的水溶液进行成像。此处显示的 prosa 延伸反应行为期间的同步钙成像，首先在刺激之前，然后在刺激之后，可以可视化蔗糖诱导的 GAMP 3.0 反应在喙部肌肉量角器的运动神经元中。

在状态之星中，蔗糖诱导的 GAMP 3.0 反应的定量显示，运动神经元对蔗糖刺激的反应是荧光急剧增加，然后是几秒钟的基线恢复期。该平台 Flies 允许使用其他方法，如电生理学、光遗传学或心理遗传学，或神经元的化学激活或 GFP 标记结构的延时实验室成像，以回答其他问题，例如突触可塑性和记忆之间的相关性。