内髂动脉注射显微骨转移的效率和选择性建模

该程序的总体目标是通过髂内动脉注射将癌细胞直接输送到后肢组织（包括骨骼）来建立实验性骨转移。所以这种方法可以帮助我们回答关于乳腺癌骨定植的关键问题，尤其是在这个过程的早期阶段，乳腺癌细胞如何与骨骼中的微环境细胞相互作用。我们今天做了髂动脉注射。

该技术的主要优点是它可以有效、选择性地建立各种癌症类型的实验性显微镜骨转移模型，而不会造成局部组织损伤。一般来说，刚接触这种方法的人会很困难，因为在显微镜上找到准确的髂动脉注射位置可能需要练习才能达到高于 90% 的注射成功率。首先通过捏住 5 到 6 周龄的 20 克小鼠的脚趾来确认适当的镇静水平。

涂抹眼药膏后，用连续的无菌 70% 异丙醇浸泡棉签擦拭剃光的右侧腹股沟区域数次，然后用优碘手术擦洗。接下来，用无菌窗帘覆盖所有小鼠。然后，使用无菌的 10 号碳钢手术刀刀片和 3 号手柄，在右下腹部的第四和第五个之间做一个 1 到 1.2 厘米的皮肤切口。

并将动物转移到标准台式解剖显微镜下。在 4X 物镜下，将钝分离钳插入脂肪组织和腹膜之间的切口，并将组织从两侧向外推出，露出髂血管和神经。接下来，使用笔直的细镊子突破血管和最靠近血管的神经之间的结缔组织。

然后，将倾斜的镊子滑过结缔组织和髂血管下方，同时将直镊子插入血管另一侧的结缔组织中，以引导倾斜的镊子穿过组织。我们建议在此步骤中将髂缘和动脉作为一个束带分离和提升。虽然肿瘤细胞仅注射到动脉中，但将两条血管一起分离可以节省时间和精力。

一旦倾斜的镊子就位，进一步将髂静脉和动脉与周围组织分开，在解剖过程中将血管保持在倾斜的镊子顶部。当血管畅通后，使用直镊子将 4-0 丝缝合线的尖端输送到倾斜的镊子上，然后缓慢而轻柔地将缝合线拉到血管下方。然后，髂总静脉和动脉血管都应由缝合线支撑。

当血管准备好后，上下移液管肿瘤细胞数次，以将它们重新悬浮到单个细胞溶液中并打碎任何团块。然后，将每只小鼠 100 微升细胞吸入 31 号胰岛素注射器中。现在，以缝合线为导向，将倾斜的镊子滑回血管下方，然后打开镊子，使血管轻轻地靠在尖端上。

用另一只手将针尖斜面向上插入镊子尖端之间动脉部分的管腔中。缓慢按下柱塞以注射细胞。细胞悬液将通过血管冲洗血液。

当所有细胞都娩出后，轻轻取出针头，保持镊子上的血管凸起以防止出血。然后，拉开缝合线。最后，快速取下镊子，将棉签按压在切口上 5 到 10 分钟以止血。

在这里，显示了髂内动脉注射 5 乘以 10 到第五个 GFP 荧光素标记的 MCF-7 乳腺癌细胞，然后通过眶后窦注射给予 d-荧光素后的代表性全动物生物发光图像。注射后第 14 天，从注射的髂内动脉后骨获得强烈的生物发光信号，而不是从对侧对照骨获得，证实了注射细胞的特异性定位。荷瘤骨骼的 H&E 染色切片还显示，在髂内动脉注射后 14 天，骨组织中有一个致密的鹅卵石状细胞群，具有大细胞核，表明骨组织中有微小的 MCF-7 转移病灶。

此外，骨切片的免疫荧光染色还显示 MCF-7 细胞与成骨细胞和成骨前细胞的共混合。一旦掌握，这项技术可以在 10 到 15 分钟内完成。按照这些过程，您可以使用其他方法来回答其他问题。

例如，我们可以使用 RNA-Seq 来分析转移生态位中的微环境细胞，并将它们与正常细胞进行比较。该技术为乳腺癌研究人员和前列腺癌研究人员提供了一种研究动物骨微转移的方法。看完这个视频，你应该对如何通过髂内动脉注射建立乳腺癌骨转移模型有了很好的了解。

请采取适当的预防措施，因为使用氯胺酮和甲苯噻嗪可能非常危险。