测量神经肌肉接头功能

该程序的总体目标是通过离体实验方法研究神经肌肉接头功能。这是通过两种方式刺激肌肉神经准备来实现的，直接在肌肉膜上和通过神经。由于膜刺激绕过了神经传递信号，因此两种收缩反应之间的任何差异都可以被视为神经肌肉接头功能的间接测量。

在这里，我们介绍了比目鱼肌坐骨神经准备中的该程序。将肌肉与其神经一起解剖并放入灌注组织浴中。它固定在力和长度控制器上，一对铂电极平行于肌肉放置。

然后将玻璃抽吸电极移动到神经的切口附近。然后应用全面的测试方案来彻底评估神经肌肉接头和肌肉功能。肌肉和神经之间的功能联系是部分和两个幸存派系的结论。

在两个组织中每个组织水平的第一个区域传达这些神经肌肉接头，它通常显示类似形态的压力。然而，在几种病理条件下，肌肉和神经之间的相互作用的功能受到严重损害，神经肌肉接头失去了复杂的形态学组织。我们程序的总体目标是通过使用离体实验方法研究神经肌肉接头功能。

这是通过以两种方式刺激肌肉神经准备来实现的。一种是通过直接刺激肌肉膜，另一种是通过刺激神经并分析肌肉特性。打开循环水浴，将温度调节到 30 摄氏度。

用 Krebs-Ringer 解决方案填充浴缸。让 O 点 4 bar 的气体混合物流经氧管并进入浴槽。打开致动器换能器和两个脉冲刺激器。

将膜刺激的当前值设置为 3 亿对，将神经刺激的当前值设置为 500 万对。通过颈椎脱臼牺牲小鼠后，去除腿部的皮肤。现在切开跟腱，在紧紧夹住肌腱的同时，将腓肠肌和比目鱼肌向上拉在一起。

一旦比目鱼肌的近端肌腱暴露出来，就切开其上方的整个小腿，并迅速将样品放入位于立体显微镜下的准备组织浴中。用一对镊子紧紧夹住比目鱼肌近端肌腱，轻轻拉动，露出坐骨神经支配。一旦神经支配暴露出来，就去除周围组织，露出大约 5 毫米的神经。

然后用一把细剪刀小心地剪断神经。通过切断跟腱以将比目鱼肌与腓肠肌分开，完成肌肉、神经切除。现在肌肉、神经准备已准备好安装到测试设备上。

在尼龙线的末端打一个滑结，并将其拧紧在跟腱周围。将近端肌腱夹在固定夹内，并将尼龙丝系在力传感器的杠杆臂上。让肌肉在溶液中平衡。

为了确定初始最佳长度，用一系列单脉冲刺激肌肉，同时轻轻改变蠕变载荷值。当抽搐力最大时，可获得最佳长度。将抽吸电极放在肌肉附近并拉入神经。

然后，在轻轻改变脉搏电流值的同时，用一系列单个脉冲刺激肌肉。肌肉通过神经刺激时产生的抽搐力应等于在膜上刺激肌肉时测得的值。确定最佳电流值后，将神经推出电极并传递几个电流脉冲。

如果先前选择的电流量过大，则通过抽吸电极传递的电流脉冲通过浴槽传导电流来引起肌肉收缩。使用自制软件，我们设计了一种用于研究比目鱼神经肌肉接头功能的自动化测试方案。该协议持续约 65 分钟，由四个不同的部分组成。

在第一部分，肌肉受到四个单脉冲的刺激。2 次直接分娩，2 次通过神经分娩。然后根据抽搐响应测量达到峰值的时间、半弛豫时间、力导数的最大值和抽搐力。

在第二部分，肌肉受到一系列从 20 赫兹到 80 赫兹的脉冲序列的刺激，这就是手足风频率。为了计算力，神经刺激和直接刺激的频率曲线。在协议的第三部分和第四部分，肌肉受到两种疲劳范式的影响，以测量神经传递失败和破伤风内疲劳。

在这些疲劳范式中，肌肉受到持续刺激，首先在膜上传递一个脉冲序列，然后通过神经传递 14 个脉冲序列。整个序列重复 20 次。第一个范例以 35 赫兹的发射频率提供。

第二个频率为 80 赫兹的破伤风频率。神经传递失败被认为在疲劳的发展中起着重要作用，因为它与动作电位传播的外部阻滞、递质释放减少以及连接疲劳能力的板兴奋性降低有关。神经肌肉接头疲劳能力的另一个方面清楚地表示为内部疲劳，这是对肌肉在单次破伤风收缩期间保持力量的能力的估计，反映了高频疲劳。

在协议结束时，使用模拟卡尺和精密刻度测量净肌肉长度和重量以计算肌肉横截面积。对肌萎缩侧索硬化症的 SOD1 转基因小鼠模型的研究突出了这种方法的潜力。事实上，当直接刺激时，转基因比目鱼肌对力衍生物和强直力的收缩反应降低，而当通过神经刺激时，收缩反应的减少幅度更大。

例如，就破伤风力而言，这些实验表明，肌肉收缩力占损伤的 25%，而另外 45% 与神经传递缺陷有关。另一个有趣的点是，当直接或间接受到刺激时，控制肌肉没有任何差异。这一发现证明该方法不会诱发任何技术伪影，因为预计神经肌肉接头在对照动物中将完全发挥作用。

关于内部疲劳，结果表明转基因比目鱼肌的值明显低于对照比目鱼肌。有趣的是，转基因比目鱼肌会因重复刺激而显着受损，这意味着可以在最长 8 分钟的刺激时间内评估神经肌肉接头功能。八分钟后，转基因肌肉在受到刺激时恢复到几乎为零的力值。

看完视频后，您应该已经了解如何测量小鼠的神经肌肉接头功能和比目鱼肌。鉴于该技术基于神经肌肉接头功能的间接测量，因此不允许在报告的缺陷与形态学或生化变化有关的情况下进行。另一方面，这种方法代表了评估这些攻击性是否影响神经传递信号的用户功能的重要方法。

最后，该协议提案可以很容易地用于测量隔膜的神经肌肉接头功能，隔膜是另一种经常涉及病理疾病的肌肉。