Preparation of Giant Vesicles Encapsulating Microspheres by Centrifugation of a Water-in-oil Emulsion

这种油包水乳化液离心法的总体目标是轻松制备薄层巨囊泡。这种方法可以帮助回答合成生物学领域的关键问题，例如基于巨大囊泡创建人工细胞。要开始此过程，请制备 25 毫摩尔的 DOPC 储备溶液和德克萨斯红 DHPE 的零点 2 毫摩尔储备溶液，溶于氯仿中。

接下来，通过在流动的氮气下蒸发 DOPC 和 Texas Red DHPE 储备液的混合物，在 5 毫升玻璃瓶的内表面形成脂质膜。将薄膜减压孵育过夜后，向样品瓶中加入 1 mL 液体石蜡。用铝箔包裹小瓶，并将混合物在 80 摄氏度下孵育过夜。

在单点 5 毫升带盖微球中，混合 237 点 5 微升 1 微米非荧光微球和 12 点 5 微升 1 微米荧光微球。现在向微管中加入 64 毫克蔗糖，然后加入 125 微升一摩尔 Tris 缓冲溶液和 875 微升去离子水。涡旋混合物 30 秒，然后超声处理 10 分钟。

制备 10 毫升 Tris 缓冲溶液后，将 1 毫升放入 1 点 5 毫升带盖微管中。溶液涡旋和超声处理后，将 1 毫升油溶液与 300 微升内水溶液混合在一个 1 点 5 毫升微管中。使用机械均基化器在室温下以 10， 000 rpm 运行两分钟，乳化微管中的两种组分。

接下来，将 300 微升油包水乳化液轻轻地铺在 1 毫升外层水溶液的上表面，在 4 摄氏度的 1 点 5 毫升带盖微管中。将微管冷却 10 分钟后，立即以 18， 000 倍 G 离心混合物 30 分钟。完成后，用推针刺穿微管底部，并在消毒的 1 点 5 毫升微管中收集一个液滴，获得沉淀的巨大囊泡或 GV。

将用于 NC 两种聚合酶链反应和杂交的粘附孵育室放在显微镜盖玻片的顶部。使用微量移液器，将 25 微升稀释的沉淀 GV 沉积在样品区域，并立即在培养室顶部放置一个 5 毫米厚的盖玻片零点。记录囊泡的显微镜图像后，首先将 UFBNA 和 UFMCHE 荧光镜单元插入显微镜进行荧光显微镜检查。

然后用激发滤光片和发射滤光片拟合单元进行分析。油包水法成功的最重要决定因素是内水溶液的比重必须大于外水溶液的比重，以便 GVs 在离心过程中沉淀。无微球和有微球的 GV 的微分干涉显微镜和荧光显微镜证实了形成低层层度的 GV。

在获得的 160 个 GV 中，55 个封装微球和 105 个是空的，封装率为 34%。GVs 中微球的体积分数估计约为 11 正负 3 体积百分比，计算体积分数的精度为 10% 至 30%使用相同的外水溶液将其他材料封装到 100 摩尔百分比的 DOPC GV 中，并且相同的方案是成功的，如微分干涉显微镜和荧光显微镜所示。按照此程序，可以执行其他方法，如流式细胞术，以回答其他问题，如阐明建模细胞。

看完这个视频，你应该对如何用封装材料制备巨型囊泡有了很好的了解。