黏膜衬里流体为体内上呼吸道免疫介质水平量化的无创性取样

这种粘膜衬里液采样方法的总体目标是在不需要刺激程序的情况下研究气道的局部免疫特征。这种方法允许您研究儿科呼吸系统疾病领域的关键问题，例如感染、哮喘和过敏。该方法的优点是您可以在体内测量未受刺激的气道粘膜中非常低水平的免疫介质。

演示该程序将由 Dr.Wolsk 完成。对于新生儿样本采集，首先从纤维羟基化聚酯滤板上切下至少两条 3 x 15 毫米的条带。接下来，将新生儿放在床上，并注意气道感染的任何症状。

然后，用镊子将一张滤纸插入婴儿每个鼻孔下鼻甲的前部约 1 厘米处，并根据需要给新生儿注射糖水以使其舒适。注意采样期间出现的任何打喷嚏、持续哭泣或鼻出血。吸收 2 分钟后，将滤纸转移到贴有标签的试管中，立即储存在零下 80 摄氏度。

演示实验程序的是我实验室的技术人员 Lisbeth Rosholm。对于气道免疫介质定量，将最多 10 个来自负 80 摄氏度储存的样品放在冰上，并记录它们的识别号。样品解冻后，将每个受试者的两张滤纸浸入每张滤纸 150 微升新鲜制备的缓冲液中，每 25 毫升缓冲液补充一片完整的蛋白酶抑制剂片剂。

将样品以 400 rpm 的转速转移至摇床中，放置 5 分钟。将缓冲液和滤纸转移到单个醋酸纤维素管过滤器的杯中。离心样品以收集微量离心管底部的过滤鼻提取物。

然后，取出杯子并将试管放在冰上。接下来，将 150 微升等分试样的鼻提取物转移到低蛋白结合储存板的各个孔中，并将板储存在负 80 摄氏度直至分析。然后，根据标准测定方案，通过基于高灵敏度电化学发光的多重阵列测量感兴趣的鼻免疫介质的浓度。

在对 620 名新生儿的代表性分析中，大多数测量的免疫介质表现出低检出率。几乎一半的样本的 IFN γ 水平低于检测下限，而不到 1% 的样本的 TNF α、CCL4 和 TGF β 水平低于检测下限。如热图所示，检测到的 20 个介质水平具有很强的多重共线性。

在无症状的小核糖核酸病毒感染新生儿中，观察到主要损害 1 型免疫介质的上调谱，表明在生命的早期定植细菌和病毒具有免疫触发作用。还确定了出生时家庭中兄弟姐妹的存在与特定的 1 型 17 型定向粘膜免疫反应之间的关联，并有证据表明这种现象与子宫内免疫启动效应的相关性，该效应与自上次分娩后的时间呈负相关。此外，与安慰剂补充剂相比，接受高剂量补充剂的母亲所生的孩子的特点是特定免疫介质上调，这表明维生素 D 促进独立于病毒、细菌、兄弟姐妹或母体特应性诱导的抗菌免疫反应。

这种微量采样方法也可以通过支气管镜使用，从而可以研究下呼吸道中的免疫介质。看完这个视频，你应该对如何测量新生儿和年龄较大的儿童体内未刺激气道粘膜中的介质有一个很好的了解。