Simple Elimination of Background Fluorescence in Formalin-Fixed Human Brain Tissue for Immunofluorescence Microscopy

Yulong Sun; Philbert Ip; Avijit Chakrabartty

doi:10.3791/56188

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Biochemistry
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Simple Elimination of Background Fluorescence in Formalin-Fixed Human Brain Tissue for Immunofluorescence Microscopy

荧光显微镜下福尔马林固定人脑组织背景荧光的简单消除

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16:31 min

September 3, 2017

DOI: 10.3791/56188-v

Yulong Sun¹, Philbert Ip², Avijit Chakrabartty^1,2

¹Department of Medical Biophysics,University of Toronto, ²Department of Biochemistry,University of Toronto

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

生物样品的背景自发荧光常常使荧光成像技术复杂化, 特别是在老年人类 postmitotic 组织中。本协议描述了如何有效地去除这些样品的自体荧光, 利用商业上可用的发光二极管光源在免疫之前 photobleach 样品。

免疫荧光显微镜检查中的一个常见问题是存在内源性背景荧光，这可能会干扰您的信号。在许多情况下，这种自发荧光会使您的结果无法解释。在该协议中，我们将演示如何使用商用 LED 台灯的光漂白从人脑组织样品中去除自发荧光。

这种方法的主要优点是与当前技术相比，在不牺牲有效性的情况下显著节省成本，并且没有外源性化合物引入样品中。开始之前，请准备 1 次 tris 缓冲盐水、TBS 和 10% 叠氮化钠的储备液。对于您想要处理的每三个标准尺寸的显微镜载玻片，您将需要一个 100 毫米 x 100 毫米见方的培养皿作为载玻片室。

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