Name: 多井板膜插入系统中3D 组织模型渗透扩散的测定与模拟方法 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 33 s
Description: 了解多井板膜插入系统中3D皮肤模型的渗透扩散系数测定与模拟方法。该技术可直接测量渗透系数，优化扩散模拟参数，适用于药物和化妆品领域的组织工程研究。

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本工作获得了德国研究基金会（Deutsche Forschungsgemeinschaft，DFG）项目编号 PO413/12-1 和 LA 1028/7-1 的资金支持。

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Uwe Marx 是 TissUse GmbH 公司的首席执行官及股东，Gerd Lindner 是该公司股东。该公司负责制造和商业化 MOC 技术。其他作者声明，对本文的发表不存在利益冲突。

本研究记录了一种用于量化通过膜上构建的组织模型的渗透作用的方法。首先通过琼脂糖凝胶测试了不同分子大小物质的渗透，以验证该方法及其相应模拟的准确性。众所周知，较小的分子能更快地穿过基质网格（凝胶过滤渗透色谱效应除外）。类似现象也见于物质通过巩膜26、人表皮膜27、人皮肤17和大鼠皮肤28的排阻实验。已有研究显示，渗透系数与相应的斯托克斯半径（即与所描述分子具有相同扩散速率的刚性球体的半径，通常小于分子的有效半径）呈负相关26,28，本实验中对不同分子大小物质的测试也观察到了类似关系。将渗透系数对1/斯托克斯半径作图后，在分子尺寸最小的四组物质中发现了良好的线性相关性（R2 = 0.93）（图6）。这表明，采用本研究所建议方法模拟得到的渗透系数处于合理范围内。
实验中46.15%的误差略高于使用Franz扩散池系统进行通透性实验所报道的结果10。一个可能的解释是异硫氰酸荧光素标记葡聚糖的尺寸分布，这一点将在后文讨论。
与使用 Franz 扩散池系统的方法相比，所描述的方法具有重要优势。首先，装置更为紧凑；实验直接在膜插件系统中进行，其尺寸与商用孔板相当（&#8764; 13 cm × 8.5 cm），可同时运行多个样本，而每个样本使用Franz扩散池则需单独的装置。其次，皮肤模型的通透性可直接在培养发生的膜插件中进行测量。使用Franz扩散池时，需将样本取出并安装至系统中，对于小样本而言操作更为繁琐，且更加耗时。
胶原细胞基质的渗透实验表明，该方法可成功应用于接种细胞的体系。本文提出的方法已针对皮肤模型进行了验证；然而，该方法也可应用于其他类型的有机细胞培养，例如肾脏或肝脏模型。
本研究采用了一种胶原-细胞模型，其中HaCaT细胞完全覆盖了模型表面（参见 图5）。这导致了渗透系数的降低，表明该方法具有足够的灵敏度，能够区分含有与不含HaCaT细胞层的胶原-细胞模型之间的渗透系数差异。理想的皮肤模型应能形成接近真实皮肤表皮的屏障结构。29，并因此验证其质量至关重要（例如，皮肤模型在实际使用前的真皮和表皮构建。皮肤模型的发育可通过染色技术进行可视化，并通过皮肤蛋白和胶原蛋白的检测进行定量分析30,31,32渗透系数也可能是评估皮肤模型发育的重要因素，但需要进一步实验加以验证。如前所述，该方法支持多个样品的平行操作，也可在培养过程中取样测量渗透性，从而监测皮肤模型该参数的发育变化。
需要注意的是，通透性是通过凝胶/胶原-细胞模型和膜同时测量的。所检测到的通透系数具有系统特异性，因此只有使用相同的膜插件时，不同皮肤模型的结果才可相互比较。此外，皮肤模型必须完全覆盖整个培养区域，以确保测试物质仅通过模型本身渗透，而非从其周围旁路渗透，否则将导致测得的通透性出现误差。另一个在未来的实验中应考虑的因素是皮肤所处的自然环境。通常情况下，皮肤表面温度低于内部区域，这可能会影响渗透条件。
为了将实验室实验与计算机模拟相结合，本文提出了一种可用于优化模拟参数的方法。对于分子尺寸较小的物质，模拟结果与实验数据吻合良好。然而，对于分子尺寸较大的物质，模拟结果与实验数据之间出现了偏差。大分子多糖可能增加摩擦力，从而减缓凝胶中的扩散过程。这种效应会导致反常扩散，可能是实验值与模拟值之间产生偏差的原因之一33,34。另一种可能的解释是荧光素异硫氰酸酯标记的葡聚糖（fluorescein-isothiocyanate-dextran）中存在较小或较大的颗粒。制造商提供的该物质分子量为给定范围内的平均值，这意味着其中可能包含不同大小的颗粒。目前尚不清楚这些颗粒的分布情况，因为较小的颗粒在凝胶和流体通道中的渗透速度更快。未来可对模拟进行扩展，以考虑这些扩散和摩擦效应。
该通透性实验及模拟方法是为在双器官芯片（2-OC）中应用而开发的。借助该模拟，此实验方法可直接推广至更复杂的实验装置。例如，膜插件系统的模拟可轻松适配双器官芯片（2-OC）的几何结构，或其他具有类似配置的系统。这种对模拟进行调节的选项可用于支持未来实验的设计。此外，还可将蒸发、异常扩散和膜效应等副作用纳入模拟，以提升模拟的准确性。该模拟程序允许修改或优化模拟方程，并可集成其他物理模块，以探究皮肤模型构建的其他方面。一个实例是在胶原细胞模型中模拟葡萄糖消耗和乳酸生成过程。
在医学物质测试中，一个特别值得关注的方面是物质在器官芯片系统中的分布情况。该模拟方法与渗透参数有助于回答诸如物质进入系统的速度有多快，以及在多器官芯片中其他组织可获得的浓度是多少等问题。该方法可支持并促进此类器官芯片系统的开发与测试。

类器官三维培养已成为药物开发和物质测试的有力工具1在这方面，由于法规要求（如化妆品行业中的相关规定），人类皮肤模型备受关注。这些要求进而推动了多种3D皮肤模型的开发，这些模型既可单独用作多孔板中的单器官培养，也可与其他器官模型联用，构建多器官芯片。 例如肝脏2.
在皮肤等效物的培养过程中，气液界面（ALI）是实现表皮正常分化的关键要素3。通常使用由底部带有液体可渗透膜的培养小室组成的细胞培养插入式装置来建立气液界面。ALI技术广泛应用于多种商业化的皮肤模型，如EpiDerm4、Phenion5和Episkin6，可用于培养直径范围从96孔板（4.26 mm）至12孔板（12.2 mm）的不同尺寸皮肤模型。本文所述方法用于测定物质在膜插入系统中的渗透性。
渗透系数是评估任何体外培养皮肤模型质量的重要参数，可用于评价活性物质穿过皮肤的速度5。特别是当药物或化妆品需要经皮施用时，该参数对于明确活性成分何时确切地透过皮肤至关重要。通过模拟还可进一步预测系统的行为，从而在涉及大量物质时显著减少所需耗时的实验工作量。
Franz 扩散池是进行皮肤及皮肤模型渗透实验的先进设备5,6,7,8,9。该装置由两个腔室组成，中间固定有样品（扩散屏障）。待测物质直接施加于样品顶部（供体腔室），而渗透化合物的浓度可在相对一侧（受体腔室）进行检测。受体侧通过温控室和磁力搅拌器确保恒定的温度和均匀的物质浓度。样品可从 Franz 扩散池受体侧的取样臂中取出。该系统的高度范围为 19 cm 至 179 cm，相对较大10,11。另一种测定类凝胶物质和组织中扩散系数的方法是荧光漂白后恢复技术（FRAP）。该技术利用激光漂白凝胶中荧光标记粒子的原理，随后通过测定漂白区域荧光恢复所需的时间来计算扩散系数12,13,14。
此外，傅里叶变换红外光谱（FTIR）可通过检测颗粒对红外光的吸收来监测其运动，从而确定物质在皮肤中的渗透过程15,16。然而，这些方法或其他成像技术（例如，双光子荧光相关光谱法17）需要使用成本高昂的仪器。
本文介绍了一种在膜插件系统中直接测量屏障通透性的方法，该系统可用于培养皮肤模型。该方法能够在紧凑的系统中对大量小尺寸样品（孔径最大4.26 mm）进行通透性实验。相比之下，Franz扩散池需要为每个样品配备独立的装置，且每个样品必须安装在设备上，对于小尺寸样品（直径4.26 mm）而言难以实现。此外，该方法无需复杂的仪器设备（例如，使用共聚焦或双光子显微镜），可实现时间和成本的双重降低。
所有实验均在微孔膜插入系统中进行，样品（屏障）由在膜上构建的琼脂糖凝胶或胶原细胞模型组成。将不同分子大小的荧光物质（供体）施加于样品顶部，使用荧光酶标仪检测底部（受体）中渗透物质的浓度（见图1）。为验证该方法并测试此模拟的准确性，制备并使用了琼脂糖凝胶作为屏障。水凝胶通常用于生物科学中多孔介质内扩散与渗透过程的研究13。随后，该方法在接种细胞的系统中进行测试，该系统由原代成纤维细胞和人成人低钙高温度角质形成细胞（HaCaT）构成的胶原基质（细胞-基质模型）组成，是一种简化的皮肤模型18,19。
此外，通过计算流体动力学的流动模拟对渗透过程进行了仿真。研究发现，通过参数优化，可从实验数据中计算出扩散系数。总体而言，该模拟具有多种应用；例如，可根据短时间实验预测渗透过程，且该模拟可显著减少实验次数。
实验方法与模拟旨在应用于器官芯片系统1,20,21，特别是已实现商业化开发的双器官芯片（2-OC）1,22,23,24,25。原则上，基于膜插件系统的任何器官模型的渗透过程均可通过此方式描述。

<table><tbody><tr><td>琼脂糖</td><td>Carl Roth</td><td>K297.2</td><td>高分辨率粉末</td></tr><tr><td>胶原蛋白</td><td>Serva</td><td>47256.01</td><td>0.4% 胶原蛋白 R 溶液</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Lonza (Biozym Scientific GmbH)</td><td>880010-12</td><td>高糖含 L-谷氨酰胺</td></tr><tr><td>FCS</td><td>Biochrom GmbH</td><td>S0615 0114F</td><td>胎牛血清</td></tr><tr><td>荧光素钠盐</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>46960-25G-F</td><td></td></tr><tr><td>异硫氰酸荧光素-葡聚糖</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>46944-500MG</td><td>4000 g/mol</td></tr><tr><td>异硫氰酸荧光素-葡聚糖</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>FD10S-250MG</td><td>10 000 g/mol</td></tr><tr><td>异硫氰酸荧光素-葡聚糖</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>FD20S-250MG</td><td>20 000 g/mol</td></tr><tr><td>异硫氰酸荧光素-葡聚糖</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>FD40S-250MG</td><td>40 000 g/mol</td></tr><tr><td>HBSS</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14170120</td><td>无钙、无镁，含酚红</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Merck</td><td>1.06467.9010</td><td>颗粒状</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>18912-014</td><td>片剂</td></tr><tr><td>Transwell 细胞培养小室</td><td>Corning</td><td>3391</td><td>96 孔，0.4 &amp;micro;m 孔径</td></tr><tr><td>Transwell 细胞培养小室</td><td>Corning (VWR)</td><td>734-1563</td><td>12 孔，0.4 &amp;micro;m 孔径</td></tr><tr><td>胰蛋白酶</td><td>Biochrom GmbH</td><td>L2143</td><td>含 EDTA</td></tr></tbody></table>

一种用于多孔板膜插件系统中三维组织模型渗透性和扩散性测定与模拟的方法

A Method for Determination and Simulation of Permeability and Diffusion in a 3D Tissue Model in a Membrane Insert System for Multi-well Plates

体外培养的皮肤模型在药物和化妆品应用中变得越来越重要，同时也被用于药物开发和物质测试。这些模型通常在膜插件系统中培养，其对不同物质的通透性是一个关键因素。通常用于测定这些参数的方法往往需要较大的样品量（例如，Franz扩散池）或复杂的设备（例如，光漂白后荧光恢复技术（FRAP））。本研究提出了一种直接在直径为4.26 mm和12.2 mm（培养面积）的膜插件系统中测定通透系数的方法。该方法使用琼脂糖凝胶、胶原凝胶以及由胶原构成的细胞模型（模拟皮肤模型）进行了验证。该方法能够准确描述不同分子大小的物质的渗透过程，以及物质通过不同细胞模型（由胶原凝胶、成纤维细胞和HaCaT细胞组成）的渗透行为。
此外，为了支持上述实验方法，建立了一个模拟系统。该模拟对于斯托克斯半径小于等于14 × 10-10 m（分子量4,000）的小分子物质，能够很好地拟合实验数据，因此是一种描述该系统的有效工具。进一步地，该模拟可显著减少实验工作量，并具有足够的鲁棒性，可扩展或调整用于更复杂的实验装置。

为了评估模拟的准确性，采用96孔膜插件系统并以2%琼脂糖凝胶作为屏障进行通透性实验。使用荧光素钠盐（NaFl）和异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖（FD）来验证扩散物质分子大小的影响，其斯托克斯半径范围为5 × 10-10 m 至 45 × 10-10 m（分子量376.27–40,000）。通过模拟的固有参数优化，使模拟结果与实验数据相拟合。
为此，仅将模拟渗透率曲线的线性部分的斜率与实验结果进行比较。对于较小的分子尺寸，模拟数据与实验数据吻合良好，NaFl 为 99.2%，FD 4,000 为 80.2%（见图 4a 和 图 4b）。对于较大的分子尺寸，偏差增大，FD 10,000、FD 20,000 和 FD 40,000 的相关性分别为 50.5%、79.7% 和 53.6%。模拟曲线在初始阶段表现出延迟，在后续过程中上升更为显著（见图 4c-4e）。
渗透系数和模拟扩散系数如表4所示。渗透系数随分子尺寸增大而减小。标准偏差介于0.08 × 10-8 m/s至0.47 × 10-8 m/s之间（N = 7），对应的绝对误差为4.18%至46.15%。较大分子的实验显示出更大的绝对误差。模拟扩散系数的变化趋势与实验测得的渗透系数非常相似。具有较大斯托克斯半径的物质，其扩散系数降低，绝对误差范围为9.09%至18.46%（N = 3）。
在额外的渗透实验中，采用四种不同的胶原细胞模型类型作为12孔膜插件系统中的屏障。这些模型包括无细胞模型，以及在胶原凝胶中包含不同组合的原代成纤维细胞、在表面培养HaCaT细胞的细胞模型。具体组合如下：仅胶原（Col.）作为无细胞模型、胶原+成纤维细胞（Col.+F.）、胶原+HaCaT（Col.+H.），以及胶原+成纤维细胞+HaCaT（Col.+F.+H.）。以含10% FCS的DMEM溶解荧光素钠盐作为供体物质。对胶原细胞模型进行图像分析时，采用苏木精-伊红（HE）染色，操作依照试剂生产商的方案进行。在图5中展示了代表性Col.+F.+H.模型的HE染色结果。HE染色轻微着色胶原基质的组织结构。成纤维细胞位于基质内部，其细胞核与HaCaT细胞的细胞核均被染成深紫色。在胶原基质顶部存在一层富含细胞核的结构，应为HaCaT细胞的细胞核，形成覆盖于模型表面的封闭层。
在表5中列出了实验测得的渗透系数和模拟的扩散系数。对于大多数含有HaCaT的模型，可以观察到其渗透/扩散系数均低于不含HaCaT的模型。渗透系数的绝对误差为10.9–24.4%，扩散系数的绝对误差为5.2%–12.9%。
<img alt="渗透示意图：带有供体、受体、屏障和接收板标签的膜插件装置。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56412/56412fig1.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="图1"> 
图1：膜插件系统中通透性实验的侧视图。 <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56412/56412fig1large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="静态平衡、浓度随时间变化图、稳态、滞后时间、浓度变化率 dcA/dt、分析" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56412/56412fig2.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="图 2"> 
图 2：渗透性实验的典型图示。 图示为受体中浓度随时间的变化。两条虚线标出了曲线中接近线性的部分。该线性部分的斜率用于确定渗透系数。<a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56412/56412fig2large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>
<img alt="静态平衡示意图，包含三维结构、供体-受体屏障设置、科学建模。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56412/56412fig3.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Figure 3"> 
图3：模拟中膜插件系统的几何结构与网格。（a）96孔膜插件系统的几何结构。（b）12孔膜插件系统的几何结构。（c）96孔膜插件系统的网格。（d）12孔膜插件系统的网格。（e）膜插件系统的横截面及参数。<a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56412/56412fig3large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="浓度随时间变化的实验数据与模拟数据对比图，展示实验结果。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56412/56412fig4.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Figure 4"> 
图4：渗透实验的实测数据与优化后模拟结果的对比。 (a) 荧光素钠盐，(b) 异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖（分子量4,000），(c) 分子量10,000，(d) 分子量20,000，以及(e) 分子量40,000。 <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56412/56412fig4large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的高清版本。</a>
<img alt="用于组织工程研究的含成纤维细胞和HaCaT层的胶原基质显微图像" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56412/56412fig5.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="图5"> 
图5：胶原细胞模型（胶原 + 成纤维细胞 + HaCaT）的代表性苏木精-伊红（HE）染色结果。 <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56412/56412fig5large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="渗透系数与1/斯托克斯半径关系图，线性回归，数据分析图表。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56412/56412fig6.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="图6"> 
图6：在96孔膜插件系统中，使用荧光素钠盐和异硫氰酸荧光素-葡聚糖，渗透系数与1/斯托克斯半径的关系。 <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56412/56412fig6large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>名称</td>
			<td>96孔系统的表达式（单位：mm）</td>
			<td>12孔系统的表达式（单位：mm）</td>
			<td>描述</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>d_tran</td>
			<td>5.65 [mm]</td>
			<td>14.7 [mm]</td>
			<td>孔的直径</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>d_a</td>
			<td>4.26 [mm]</td>
			<td>12.1 [mm]</td>
			<td>膜的直径</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>d_w</td>
			<td>8.79 [mm]</td>
			<td>21.97 [mm]</td>
			<td>受体的直径</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>h_b</td>
			<td>2 [mm]</td>
			<td>2 [mm]</td>
			<td>屏障的高度</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>h_sp</td>
			<td>1 [mm]</td>
			<td>1 [mm]</td>
			<td>孔与底部之间的距离</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>h_a</td>
			<td>4.73 [mm]</td>
			<td>5.24 [mm]</td>
			<td>受体的高度</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>b</td>
			<td>h_b/2</td>
			<td>-</td>
			<td>浸入深度</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>r</td>
			<td>((d_a)^2+4*b^2)/(8*b)</td>
			<td>-</td>
			<td>浸入球的半径+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>r_z</td>
			<td>r+h_b</td>
			<td>-</td>
			<td>浸入球的 z 轴位置+</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表1：“化学物种传输”模拟的几何参数。+仅用于96孔膜插件系统中琼脂糖凝胶的模拟。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>名称</td>
			<td>表达式</td>
			<td>数值</td>
			<td>描述</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C_fl</td>
			<td>0.1 [mg/ml]/376.28 [g/mol]</td>
			<td>0.26576 mol/m2</td>
			<td>Fl.So. 的浓度</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C_4</td>
			<td>2 [mg/ml]/4000 [g/mol]</td>
			<td>0.5 mol/m2</td>
			<td>FD 4.000 的浓度</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C_10</td>
			<td>2 [mg/ml]/10000 [g/mol]</td>
			<td>0.2 mol/m2</td>
			<td>FD 10.000 的浓度</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C_20</td>
			<td>2 [mg/ml]/20000 [g/mol]</td>
			<td>0.1 mol/m2</td>
			<td>FD 20.000 的浓度</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C_40</td>
			<td>2 [mg/ml]/40000 [g/mol]</td>
			<td>0.05 mol/m2</td>
			<td>FD 40.000 的浓度</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dif_w</td>
			<td>1e-9 [m^2/s]</td>
			<td>1E-9m2/s</td>
			<td>混合水的扩散系数</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表2：“化学组分传输”模拟的物理参数。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>名称</td>
			<td>表达式</td>
			<td>描述</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C</td>
			<td>Acceptor(c)</td>
			<td>受体浓度的定义</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D</td>
			<td>D_search*1e-10</td>
			<td>D 的变化因子</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表3：“优化”模拟的参数。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>渗透物</td>
			<td>渗透系数 (m/s)×10-8</td>
			<td>扩散系数 (m/s2)×10-10</td>
			<td>渗透物的斯托克斯半径 (m)×10-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fl.So.</td>
			<td>4.79 ± 0.20</td>
			<td>1.94 ± 0.34</td>
			<td>5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FD 4,000</td>
			<td>2.37 ± 0.31</td>
			<td>0.65 ± 0.12</td>
			<td>14</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FD10,000</td>
			<td>1.67 ± 0.47</td>
			<td>0.22 ± 0.02</td>
			<td>23</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FD 20,000</td>
			<td>0.65 ± 0.30</td>
			<td>0.29 ± 0.04</td>
			<td>33</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FD 40,000</td>
			<td>0.27 ± 0.08</td>
			<td>0.14 ± 0.02</td>
			<td>45</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表4：在96孔膜插件系统中，不同斯托克斯半径的物质通过2%琼脂糖凝胶+膜的渗透性与扩散系数。（荧光素钠盐 = Fl. So.，FITC葡聚糖 = FD）
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>模型</td>
			<td>通透系数 (m/s)×10-8</td>
			<td>扩散系数 (m/s2)×10-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Col.</td>
			<td>2.18 ± 0.29</td>
			<td>1.22 ± 0.06</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Col.+F.</td>
			<td>1.77 ± 0.38</td>
			<td>0.93 ± 0.12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Col.+H.</td>
			<td>1.64 ± 0.40</td>
			<td>0.96 ± 0.05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Col.+F.+H.</td>
			<td>1.65 ± 0.18</td>
			<td>0.88 ± 0.11</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表5：荧光素钠盐通过12孔胶原细胞模型的通透性与扩散系数-细胞培养小室膜系统（Col. = 胶原蛋白，F. = 成纤维细胞，H. = HaCaT）

本文介绍了一种用于多孔板膜插件系统中测定通透性的方法，以及通过模拟进行扩散系数计算的in silico参数优化方法。

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