现场验尸狂犬病快速免疫性诊断测试资源有限设置与进一步分子应用

我们使用快速免疫球形诊断测试（RIDT）（从脑活检采样到最终解释），为现场条件下动物狂犬病的验尸诊断提供完整的方案。我们还描述了使用该器件进行分子分析和病毒基因分型的进一步应用。

该协议可用于动物狂犬病的验尸诊断，从现场的词的初始视图到集中活动的分子构象。快速免疫血液学诊断检测是非洲和亚洲农村和农村特征的有用替代方案，没有狂犬病诊断的参考材料。演示这个程序的将是西蒙·博纳斯，一个来自我实验室的技术员。

展示程序的第一部分将是易卜拉希马·迪科，一个来自马里巴马科的拉玛托瓦中央维泰里耶的技术员。要进入前体巨无霸，使用刀在第一颈椎之前取出动物头部。并使用适当的工具收集脑干样本。

如一次性移液器、吸管、夹子或滴管，如图所示。然后，脑干清晰可见，如这里用这个移液器的尖端显示。使用适当的工具收集脑干的一部分，如吸管。

小心插入，轻轻转动以收集脑组织。取出吸管前不要忘记用手指插上吸管，以便进行活检。也可以使用夹子。

为了收集更大的脑干在前人巨无霸的水平。或者，可以直接使用工具包中提供的滴管来收集脑干。与饮用的吸管类似，在按下并轻轻转动以收集脑组织的同时，小心插入滴管。

然后吸气脑组织，并放在一个容器，如管子的塞子。为了准确诊断，在样品采集过程中收集含有脑干的脑干至关重要。用棉签或滴管小心地将大脑材料直接压碎在含有缓冲液的管子中约30秒，直到获得均匀的悬浮液。

使用滴管，将四滴约 100 微升的悬浮液沉积在测试设备上的样品入口中。如果由于高粘度悬浮液而延迟或加速迁移的开始，请用滴管轻轻划伤设备沉积站点的底部。等待完整的示例迁移，在读取测试设备之前一到五分钟。

当可见两条线时，样本对狂犬病呈阳性。如果仅存在控制线，则为负数。如果只有测试线或没有线可见，则无效。

要从设备样品中提取RNA，请小心打开设备并取出滤纸。收集样品的沉积区域，将样品放入一毫升三试剂LS中。在室温下一小时后，通过定期的温和手动搅拌，根据标准RNA提取方案从管上清液中提取RNA。根据制造商的建议，添加两微升糖原，以方便RNA沉淀。

使用无核酸酶水将RNA再暂停的最终体积调整为50微升。并根据表为三种不同的逆转录酶定量PCR测定准备主混合反应溶液。使用底像和探针，如表中所示。

在稀释的RNA样品的五微升。和15微升主混合到三个不同的测定在适当的96井反应板复制。将每个检测的正负控制添加到每个板的重复。

然后按照表中所示的热循环条件运行不同的检测。可以按表中的概述分析结果。收集脑活检尽可能简单，以保证收集高质量的样本。

与参考技术相比，使用这些方案的所有实验室中，快速免疫色谱诊断测试的灵敏度和特异性都很高。根据被检测样本的累积数量，总体灵敏度和特异性均超过95% 快速免疫色谱诊断测试适用于检测受感染动物脑活检中的利萨病毒。然而，由于利萨病毒抗原水平对狂犬病诊断很重要，因此在检测滴定病毒悬浮液时，检测的极限仍然很高。

在这些具有代表性的结果中，通过双组合泛利萨病毒逆转录酶定量PCR靶向利萨病毒病毒聚合酶获得RNA检测后，进行了51组阳性快速免疫球谱诊断测试。此外，使用部分核蛋白基因的半巢PCR靶向，可对14个样本进行基因分型。基于 RT PCR 后或通过其他长字符串分析对测试条进行诊断和提取， 用于基因分型。

快速免疫血液测量诊断测试可以提供快速准确的狂犬病诊断。这对保持连续波基监视和控制系统中的波功能至关重要。尽量减少人类。