一种用于测试（新）辅助治疗的软组织肉瘤不完全切除小鼠模型

本方案旨在模拟肿瘤减瘤手术后残留病灶的临床情况，因此使我们能够在术后伤口愈合的背景下测试新的癌症治疗方法。该技术的优势在于，能够标准化手术造成的伤口大小以及残留肿瘤的量。该技术对于临床前研究尤为重要，可用于识别那些易发生局部复发的癌症（例如软组织肉瘤）的新疗法。

这种可视化演示对于展示翻转技术至关重要，该技术可使我们暴露附着在皮肤侧的肿瘤。按照文本方案所述，首先在小鼠体内皮下接种已准备好的癌细胞以启动实验。接种后第12天，当肿瘤大小达到约50平方毫米时，在手术前30分钟，通过颈背部皮下注射给予小鼠100 µL的丁丙诺啡。

在手术区域放置覆盖实验台布的加热垫，并设置麻醉用鼻罩。准备好清洁的手术器械，确保触手可及，包括氯己定、棉签、纱布、眼用凝胶、两个弯头镊子、剪刀、施夹器、取夹器和备用夹子。将加热培养箱预热至37摄氏度，并另设一个加热垫用于术后恢复。

请注意，该操作需要两人配合完成。操作过程中必须由一名助手密切监测小鼠的呼吸情况。按照文本方案中所述方法对小鼠进行麻醉后，需进行夹趾试验和角膜反射试验，以确认小鼠已完全麻醉，方可开始手术。

用少量眼用凝胶覆盖小鼠的眼睛，以避免眼睛干燥。首先用氯己定擦拭手术区域。使用镊子和剪刀，在距离肿瘤3毫米处沿背部做一条1厘米长的直线切口。

不要直接切开覆盖肿瘤的皮肤，因为其愈合效果不佳。避免使用手术刀切割肿瘤，应使用镊子挖取肿瘤组织。用镊子将肿瘤与腹膜之间的筋膜及皮下脂肪组织剥离。

皮下肿瘤通常附着于皮肤侧。用镊子轻轻夹住带瘤侧的皮肤，将伤口打开，并翻转肿瘤使其暴露于体外可见。使用剪刀从靠近切口处的肿瘤基部开始，将需切除一侧的肿瘤包膜剪除。

对于50%的减瘤手术，应从肿瘤中部进行切割。使用弯头镊子将要切除的肿瘤部分挖出，并将减瘤区域内的任何残留物一并清除。

对于75%的肿瘤减容，首先进行50%的肿瘤减容，然后将剩余50%的肿瘤切除一半。使用弯头镊子刮取25%的肿瘤组织。关闭手术部位时，将剩余肿瘤重新置于皮肤下方，用镊子将皮瓣拉拢，对齐伤口处的皮肤边缘。

在距离伤口边缘5毫米处固定皮肤，并使用外科缝合夹从靠近镊子的一侧开始闭合伤口。根据需要使用足够数量的缝合夹，确保没有皮下组织暴露。通常使用3至4个缝合夹，每两个缝合夹之间间隔2毫米。

将小鼠放入温暖的加热舱中使其恢复。将小鼠的笼子放在加热垫上。在加热舱中监测小鼠，直至其从麻醉状态中恢复。

然后将小鼠放回笼中，将笼子继续置于加热垫上约10分钟，直至小鼠活动能力恢复。给予小鼠湿润且柔软的食物。术后1小时观察小鼠恢复情况。

在当天结束时及次日早晨再次观察小鼠，确保夹子仍处于原位。根据研究所需的治疗方案，可在围手术期或新辅助治疗阶段的任意时间对小鼠进行处理。例如，在接种后第15天，通过腹腔注射给予小鼠一次剂量为100 µg的抗CTLA-4抗体。

或者，在接种后的第15、17和19天，分别以每次200微克的剂量腹腔注射抗PD-1抗体，共给药三次。对面积为50平方毫米的肿瘤进行不完全手术切除（如虚线所示），在未接受辅助免疫治疗的情况下，肿瘤再生长的可重复性达到100%。因此，将肿瘤生长至50平方毫米作为部分减瘤的理想尺寸。

随后利用该模型测试了针对检查点分子的辅助性免疫疗法，所用抗体包括细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4和程序性死亡受体1。使用抗CTLA-4抗体治疗小鼠，治愈率达到80%；而使用抗PD-1抗体治疗小鼠，治愈率为25%。抗PD-1治疗所产生的反应为测试其新的联合疗法提供了机会，以进一步提高治疗反应率。重要的是，残留的肿瘤必须保持与皮肤相连，否则血液供应将被切断，导致肿瘤发生坏死。

通过该方案，可采用多种方法对肿瘤进行分析，例如流式细胞术，以评估手术对肿瘤浸润细胞的影响。该小鼠模型使我们能够探索伤口愈合如何影响癌症免疫治疗。