用于测试（新）辅助疗法的不完全切除软组织肉瘤的小鼠模型

该协议旨在模拟肿瘤切除手术后残留疾病的临床设置，因此使我们能够在术后伤口愈合的背景下测试新的癌症疗法。这种技术的优点是，它允许伤口的愈合量和肿瘤的量保持标准化。这项技术对于临床前研究尤其重要，因为临床前研究可以确定癌症的新疗法，它在当地复发，例如软组织肉瘤。

这个视觉演示对于演示反转技术至关重要，它使我们能够暴露贴在皮肤侧的肿瘤。从小鼠中准备好的癌细胞的皮下接种开始，如文本协议中所述。第12天，接种后，当肿瘤达到约50平方毫米的大小时，在手术前30分钟，在颈部擦伤中，用100微升的丁丙诺啡皮下给小鼠服用剂量。

设置手术区，用覆盖着长凳涂层的热垫设置鼻锥进行麻醉。安排干净的手术设备，以便他们很容易到达，包括氯沙丁，拭子，纱布，眼凝胶，两个弯曲的钳子，剪刀，夹子施用器，夹子去除剂，和夹子填充。将加热室加热至37摄氏度，并设置另一个加热垫进行回收。

请注意，此过程需要两个人。助理必须在手术过程中密切监视鼠标的呼吸。对文本协议中描述的小鼠进行麻醉后，执行捏合测试和角膜反射测试，以确保小鼠在开始手术前完全麻醉。

用少量的眼部凝胶盖住老鼠的眼睛，以避免眼睛干燥。开始这个手术，用氯环丙胺擦拭手术区。用钳子和一把剪刀沿着后侧做一厘米的直切口，离肿瘤三毫米远。

不要直接切开覆盖肿瘤的皮肤，因为它不能愈合良好。避免使用手术刀切肿瘤，并使用钳子铲块。使用钳子，拉开肿瘤和内膜之间的筋膜和皮下脂肪组织。

皮下肿瘤通常附着在皮肤侧。打开伤口，用钳子轻轻握住肿瘤轴承侧的皮肤，并反转肿瘤，使肿瘤在外可见。用一把剪刀，从肿瘤胶囊的一半切开，从肿瘤底部最接近开口开始。

对于50%的脱骨手术，切过肿瘤的中间。使用弯曲钳子挖出要切除的肿瘤部分。从德布尔克地区挖出任何残余物。

对于 75% 的脱骨，首先执行 50% 的肿瘤脱布，然后切成一半的剩余的 50% 的肿瘤。使用弯曲钳子挖出25%的肿瘤。要关闭手术地点，请将剩余的肿瘤放回皮肤下方，并使用钳子，将皮肤皮瓣拉在一起，沿着伤口将皮肤拉上线。

将皮肤从伤口边缘握在一起五毫米，并使用手术夹关闭伤口从侧面开始，最接近钳子。根据需要应用尽可能多的夹子，以确保没有底层组织暴露。通常，应用三到四个夹子，夹子之间有两毫米的间隙。

将小鼠放入加热室，让小鼠恢复。将鼠标的笼子放在热垫上。监测加热室中的小鼠，直到它们从麻醉剂中恢复过来。

然后，把老鼠放回笼子里，把笼子放在热垫上再呆10分钟，直到老鼠变得更活跃。给老鼠湿和软的食物。手术后一小时监测小鼠恢复。

在一天结束和次日早晨再次监测小鼠，并确保剪辑保持到位。在任何给定时间，以出现或新辅助疗法治疗小鼠，具体取决于感兴趣的治疗。例如，在接种后的第15天，用一剂100微克的抗CTLA-4内皮治疗小鼠。

或者，在接种日、15日、17日、19日，用三剂200微克的抗PD-1内皮治疗小鼠。50平方毫米肿瘤的不完全手术切除，这里用虚线表示，在没有辅助免疫治疗的情况下，肿瘤的再生率为100%。因此，肿瘤生长到50平方毫米的大小是部分脱发的理想大小。

然后，该模型用于测试辅助免疫疗法，使用抗体对检查点模块，细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白四和编程死亡受体1。对抗CTLA-4小鼠的治疗，治愈率为80%，而抗PD-1小鼠的治疗治愈率为25%，抗PD-1的抗反应为测试其新颖组合提供了机会，进一步提高了反应率。重要的是，剩余的肿瘤保持附着在皮肤上，否则血液供应将被切断，肿瘤将成为坏死。

按照这个程序，肿瘤可以通过各种方法进行分析，如流细胞学，以评估手术如何影响肿瘤渗透细胞。这个小鼠模型使我们能够探索伤口愈合如何影响癌症免疫疗法。