血小板衍生的Ti植入物的细胞外囊泡功能化

细胞外囊泡与生物材料的组合是再生医学研究的理想方法。因此，这项研究报道了钛功能化与EV作为骨科和骨再生的实用工具。与其他策略（如聚合物截留或生化结合）相比，滴铸功能化是一种简单且低成本的方法。

通过在玻璃烧杯中用去离子水洗涤钛盘来开始钛表面功能化。然后在用70%乙醇洗涤圆盘之前丢弃水。倾析溶液，使洗涤的植入物在去离子水中以50°C超声处理五分钟。

丢弃水后，将钛植入物在40%氢氧化钠溶液中孵育50°C，搅拌10分钟，然后在去离子水中超声处理植入物，如图所示。接下来，用去离子水对植入物进行至少五次洗涤。直到 pH 指示剂上的 pH 值呈中性。

如前所述，通过用50%硝酸代替氢氧化钠来重复超声处理和孵育过程。在将植入物储存在70%乙醇溶液中之前，用去离子水进行洗涤和超声处理。将钛植入物在室温下在30%硝酸溶液中孵育30分钟，轻轻搅拌。

孵育后，用去离子水进行至少五次洗涤，直到pH指示剂上的pH值为中性。然后将钛植入物在室温下在去离子水中孵育过夜。第二天，在40°C的真空下干燥植入物10分钟。

在细胞培养柜下工作，将钛植入物放置在96孔板中，机器侧面朝上。通过解冻EV溶液来排列细胞外囊泡EV滴铸，并以三秒钟的脉冲涡旋溶液。混合后，根据纳米颗粒跟踪分析确定的浓度，在钛表面上沉积40微升EV溶液，以固定每个植入物最多4 x 10 ^ 11 EV。

接下来，将板置于37°C的真空条件下约两个小时，或直到滴剂完全干燥。根据钛植入物的数量和真空室中存在的水来调整干燥时间。通过纳米颗粒跟踪分析测量从钛盘释放的EV的数量。

在第2天，大约10 ^ 9辆电动汽车被释放，随后在第6天，第10天和第14天持续释放。在细胞接种到植入物后48小时，用乳酸脱氢酶或LDH释放测定法评估钛EV的体外细胞生物相容性。钛EV表现出的LDH量低于最大可接受的细胞毒性值。

然而，钛对照组显示出更高的LDH活性水平。最重要的步骤是涂层植入物的真空干燥。重要的是要确保所有水分都蒸发以获得最佳的物理吸附。