小鼠心肌梗死和心肌缺血再灌注损伤的诱导

在这里，我们描述了一种简单且可重复的方法，该方法可以通过显微操作精确结扎左前降支冠状动脉来诱导小鼠心肌梗死或心肌缺血再灌注损伤。

本研究描述了一种可定制的方法，通过显微操作精确结扎左前降支冠状动脉，在 Miro 中创建心肌功能模型。该协议减少了手术时间，确保了可控的梗死大小，并提高了小鼠的存活率。在整个手术过程中，使用带有预热至 37 摄氏度的加热垫的矩形 OT。

手术前，用紫外线和70%酒精对电路板进行消毒。首先将鼠标放在 OT 上，仰卧位，头部下方有纱布，以免眼睛过热。将眼药膏涂抹在眼睛上，以防止眼睛干燥。

在胸部使用毛发去除霜，用无菌棉签均匀按摩一分钟。用纱布擦拭多余的毛皮。使用聚维酮碘，然后使用70%酒精清洁该区域，并用纱布覆盖胸部。

在上切牙下方使用 4-O 缝合线并将其固定在锚点上，以保持嘴巴略微张开并便于插管。拉动尾巴以保持身体笔直，并用胶带将其固定在 OT 上。用胶带固定四肢并将它们拧紧在锚点上。

不要过度伸展前肢，以免呼吸功能受损。用镊子打开下颌并抬起舌头。然后使用照明器观察喉咙和声门。

轻轻地将一根 22 号插管和一根钝的截短针穿过口腔插入气管，在喉咙下方约 1 厘米处。用一只手握住舌头，用钝镊子稍微向上移动。同时用另一只手将管子轻轻插入气管。

小心不要将管子插入食道。小心地取下针头。在连接到呼吸机之前，通过将管子放入水中以形成气泡来检查插管。

将气管插管连接到设置为每分钟 120 次的呼吸机，并将潮气量调节为 250 微升。通过检查双侧对称性胸廓扩张来验证插管。然后用胶带固定与 OT 的连接，以免其脱落。

将心电图电极放在爪子上并将它们连接到心电图记录仪。在整个手术过程中监测心脏电生理学。取下胸部的纱布。

用 70% 酒精对切口区域进行三次擦洗循环消毒。为了减少手术部位的污染，用无菌手术单覆盖小鼠，在手术区域上有一个孔。用手术刀做斜皮肤切口后，通过对皮下组织进行钝性解剖来暴露肋骨。

注意不要伤害血管、肋骨和肺部。使用无菌棉涂抹器止血。确定第三肋间隙，切开约 6 至 8 毫米的切口。

然后通过对肋间隙中的组织进行钝性解剖来打开胸腔。注意不要伤到胸内动脉。使用镊子跨越肋间隙。

将预先消毒的自制牵开器插入胸腔，然后向后拉，将切口扩散到大约六毫米宽。用橡皮筋将牵开器连接到 OT 上。小心地切除周围的组织，使心脏完全暴露。

用弯曲的镊子轻轻拉出心包，而不会伤害心脏。使用解剖显微镜并引导聚焦且适当的光线进行 LAD 可视化。轻轻按压所选结扎位置下方的部位以暂时扩大 LAD，然后重新检查 LAD。

在解剖显微镜下，使用锥形针通过 8-0LAD下方的丝绸结扎。确保针头不够深而无法进入左心室，也不要太浅，以免损坏 LAD。用松散的双结系紧结扎。

将一根 2 到 3 毫米的 PE-10 管放入平行于动脉的环中。轻轻收紧结扎环，直到它绕过动脉和管道。然后用滑结固定环。

注意不要因过度收紧压力而损坏心肌壁。结扎后左心室前壁苍白，证实LAD血流停止。如果需要永久结扎，请按照文本手稿中的说明进行。

从切口上取下牵开器。然后用斗牛犬夹暂时闭合伤口。确保鼠标继续连接到呼吸机。

当缺血期结束时，取下斗牛犬夹并插入牵开器以打开切口并暴露心脏和结扎部位。解开滑结并取下 PE-10 管。苍白的颜色变为粉红色，证实了血流恢复。

同时，为了检测再灌注，观察心电图是否有ST段抬高的潜在溶解。离开 8-0如果进行随后的埃文斯蓝和 TTC 染色，则原位结扎。否则，请在此步骤中移除缝合线。

取出牵开器，用4-O丝线缝合第三和第四肋骨，闭合切口。注意不要伤到肺部。轻轻按压胸部，同时系上缝合结，以排出可能滞留在胸腔中的空气。

用连续的4-O丝线缝合肌肉层。从气管插管、皮肤切开、开胸手术、LAD鉴定和结扎到再灌注，均获得实验过程的标准图像。代表性心电图图像证实了结扎后心肌缺血和再灌注，并伴有显著的ST段抬高。

滑结解开后ST段抬高的溶解。开胸手术前，保持气道畅通非常重要，最重要的是确保LAD结扎牢固，避免损伤。该程序之后将进行超声心动图以评估心脏功能以及 TTC 以评估心肌损伤。