使用琼脂糖凝胶为基础的微流体装置的评估神经干细胞的运动

嗨，我是 Kevin won。我是康奈尔大学生物流体实验室的工程硕士生。今天，我将讨论使用基于 agris 的微流控装置来研究 EGF 表皮生长因子对 Maureen 神经干细胞的影响。

该设备基本上由三个微流体通道组成，每个通道宽 150 微米。EGF 被泵入其中一个侧通道，缓冲液被泵入另一个侧通道。它基本上是在中央通道上设置静态线性化学梯度。

由于 EGF 扩散物很容易通过农用凝胶扩散，因此神经元干细胞接种在中心通道中，并通过显微镜监测其迁移过程。因此，这些设备基本上由有机玻璃顶层组成，该顶层具有用于连接管道的所有入口和出口。下面是一个农业凝胶膜，里面有四个图案装置。

它由 PDMS 垫片包围，这保证了我们在整个器件中具有恒定的厚度。PDMS 和凝胶组装在涂有 etc.这有助于细胞粘附在载玻片上。

此外，不锈钢板用于安装整个设备，我们 Sam 用螺钉将设备夹在中间。野生型细胞系已用逆转录病毒载体转染以过表达野生型 EGF 受体，而 delta 细胞系已转染 EGF 受体的突变版本，使其能够在没有 EGF 配体的情况下具有组成活性。好的，我首先要解释一下我们的微流体装置的组装过程。

因此，我首先将 PDMS 垫片放在我们主控中硅微通道的溢流特征周围。所以现在我要称出 0.3 克 agros。所以现在我要提出 10 mils 的 CO2 独立介质，并将其添加到农业中。

我将上下吹打，将 aros 粉末与独立于 CO2 的培养基混合。现在我们已经准备好使用微波炉了。正如你现在看到的，agros 现在已经液化了，但还剩下一些颗粒。

我将尝试旋转它以溶解颗粒并去除气泡。因此，我将熔融的 agros 倒在硅母版的浮雕特征上，现在我将取一个无菌载玻片并将其放在 PDMS 垫片上。我把它放在一个角度，试图将农用凝胶中的大部分气泡挤出来。

我施加了压力，我将继续施加压力，直到 agros 外壳凝固。所以一到两分钟后它就凝固了。现在我将从幻灯片上去除多余的 agros。

下一步是轻轻地从载玻片上滑下，这个载玻片可以安装就处理掉。现在我将尝试将图案轻轻地转移到我之前涂有纤连蛋白的载玻片上。我基本上使用这种塑料无菌片来帮助我用 PDMM MS 垫片抬起 agros 图案，我将 agros 图案与通道向下转移到载玻片上。

现在它已经牢固地固定在载玻片上，我将在每个储液器上打孔，以便塑料歧管可以接触到通道。我将使用一个小的金属打孔器来做到这一点。现在我们已经完成了在设备中打孔。

我将添加 500 微升 CO2 独立培养基，以防止微通道干燥，现在让它静置一到两分钟。好的，一到两分钟后，我将尝试排空多余的介质，现在我将打入图案 agros 的孔与有机玻璃歧管的入口和出口孔对齐。一旦孔对齐，我就用力按压以形成一个漂亮的密封。

现在我将有机玻璃歧管放在不锈钢支架上，现在我将使用螺钉轻轻地将设备夹在一起。我非常小心，不要把螺丝拧得过紧，因为这会压扁通道，我以顺时针方向把螺丝放进去，以防止图案 Agros 凝胶内部开槽。我将抽取 1 mil 的介质，并使用这个注射器来测试设备。

正如你所看到的，我正在将液体注入每个微通道，并寻找从每个出口流出的液体。所以现在我已经将组装好的设备放入显微镜的环境室中。这保持在 37 摄氏度，因此这将使设备预热并为我们需要接种细胞做好准备。

正如你所看到的，我已经将两个 parasol 泵管穿过设置。我目前正在用 PBS 冲洗管路，为我们的实验做准备。所以现在我们要设置管道。

我要将遮阳伞泵管穿过已经打孔的盖子。每根管子上都有一个特定数量的槽口，这样我就可以识别管子的入口和出口。因此，带有四个缺口的管子将收到每密耳 10 纳克的热量。

EGF 溶液现在会将管路连接到设备上。因此，我将根据每个设备的缺口数量将其附加到每个设备上。所以它对应于它所采用的解决方案。

现在我连接出口管。我们使用透明的 Tigon 管，以确保介质确实流过出口管，并且通道中没有堵塞。现在我将启动遮阳伞泵。

所以现在我开始将细胞接种到中心通道的过程。首先，我取出传感器通道中多余的介质。所以现在我会看到单元格。

细胞已经悬浮在独立于 CO2 的培养基中。我被卖掉了，我在中央通道的入口处坐了 60 微升，在出口处坐了 20 微升。希望这些单元将通过重力驱动的流动就位。

我将对其他两个敏感通道重复此过程，现在我们将在显微镜下观察，看看细胞定位是否成功。所以现在细胞已经粘附在载玻片上，几分钟后它们将开始扩散并获得其独特的形态。所以今天我们介绍了实际设备的组装、试剂的制备以及我用来对设备内细胞迁移进行成像的显微镜技术。

总之，我们希望该设备将有更广泛的退位，特别是在临床环境中。所以水平图 1。它显示了 C 17.2 细胞的轨迹和垂直增加的 EGF 浓度。

它显示了我们在实验中使用相同 EGF 浓度的 C 17.2 细胞的各种菌株的轨迹。亲本细胞数据显示，在 10 ng/mil EGF 浓度梯度处有一个运动峰值，表明受体在较高 EGF 浓度下已被配体饱和。野生型数据显示，在 100 纳克/密耳浓度或 EGF 时，运动性会增加。

这表明受体在较高的 EGF 浓度下不会变得饱和。这是有道理的，因为它们被设计为过表达 EGF 受体。最后，δ 细胞系数据表明细胞的运动性与 EGF 浓度大致无关。

这也是意料之中的，因为突变的 EGF 受体被设计为独立于 EGF 的存在而被激活。