Immunology and Infection

מודל אוזן עכבר להערכת דרמטיטיס במגע אלרגי

Published: March 24, 2023 doi: 10.3791/65120

Haifeng Shao^1,2,3,4, Jialin Deng^2,3,4, Yanqing Liu^1,2,3,4, Niuniu Yang^1,2,3,4

¹Department of Traditional Chinese Medicine, The Affiliated Hospital of Yangzhou University, Yangzhou University, ²Department of Traditional Chinese and Western Medicine, Medical College, Yangzhou University, ³The Key Laboratory of Syndrome Differentiation and Treatment of Gastric Cancer of the State Administration of Traditional Chinese Medicine, Yangzhou University, ⁴Jiangsu Key Laboratory of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine for Prevention and Treatment of Senile Diseases, Yangzhou University

Summary

כאן, אנו מתארים את השיטות לגרימת דרמטיטיס מגע אלרגי באוזני עכבר על ידי 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) וכיצד להעריך את חומרת דרמטיטיס מגע אלרגי.

Abstract

העור הוא קו ההגנה הראשון של גוף האדם ואחד האיברים החשופים ביותר לכימיקלים סביבתיים. דרמטיטיס מגע אלרגי (ACD) היא מחלת עור נפוצה המתבטאת בפריחה מקומית, אדמומיות ונגעים בעור. המופע וההתפתחות של ACD מושפעים מגורמים גנטיים וסביבתיים כאחד. למרות שחוקרים רבים בנו סדרה של מודלים של ACD בשנים האחרונות, הפרוטוקולים הניסיוניים של מודלים אלה שונים זה מזה, מה שמקשה על הקוראים לבסס אותם היטב. לכן, מודל יציב ויעיל של בעלי חיים הוא בעל משמעות רבה למחקר נוסף של הפתוגנזה של אטופיק דרמטיטיס. במחקר זה, אנו מפרטים שיטת מידול באמצעות 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) כדי לגרום לתסמינים דמויי ACD באוזניים של עכברים ומתארים מספר שיטות להערכת חומרת דרמטיטיס במהלך דוגמנות. פרוטוקול ניסויי זה יושם בהצלחה בכמה ניסויים ויש לו תפקיד קידום מכירות מסוים בתחום מחקר ACD.

Introduction

דלקת עור אלרגית במגע (ACD) היא מחלת עור נפוצה המאופיינת בתסמינים דמויי אקזמה במקום המגע, בצקת ואריתמה במקרים מתונים, ופפולות, שחיקה, הפרשה או אפילו צלקות מסיביות במקרים חמורים¹. זה משפיע על עד 20% מהאוכלוסייה והוא יכול להשפיע על אנשים בכל גיל². ACD מתרחשת לעתים קרובות אצל אנשים שנחשפו לאלרגנים שוב ושוב ויכולה להיגרם על ידי התגובה החיסונית של הפרט לאלרגן אחד או יותר בבית^{או במקום העבודה} 3. רגישות יתר מאוחרת מסוג IV נחשבת לסוג העיקרי של תגובה חיסונית ב- ACD⁴. באזורים בעור שנחשפו שוב ושוב לאלרגנים, תאי זיכרון T מצטברים במספרים גדולים ומעוררים תגובות חיסוניות ודלקתיות ^3,5,6. מטרת עבודה זו היא להציע טכניקת מעבדה אמינה לחקירה נוספת של תגובות אימונולוגיות ודלקתיות בפיתוח ACD.

הופעת ACD נובעת בדרך כלל מרגישות יתר למגע הנגרמת על ידי חשיפה חוזרת ונשנית לכימיקלים. חוקרים רבים פיתחו מודלים שונים של בעלי חיים ACD בעכברי בית^7,8, שרקנים ^9,10 ובעלי חיים אחרים במהלך העשורים האחרונים^, על מנת לדמות את הופעת המחלה. רוב שיטות הניסוי מורכבות משני שלבים: רגישות בטן (אינדוקציה) ומתן גירויים על הגב או על תנוך האוזן (גירוי). חומרים כימיים נפוצים כוללים בעיקר 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB)/1-chloro-2,4-dinitrobenzene (DNCB)^8,9,11, oxazolone 12, urushiol ¹³^, וכו ' ביניהם, DNFB ו- DNCB הם הנפוצים ביותר, שדווחו לראשונה באוקטובר 1958¹⁰. דגם רגישות ניקל¹⁴ ודרמטיטיס מגע פוטואלרגי מודל¹⁵ משמשים לעתים קרובות.

אנו מציגים שיטה ניסיונית לבניית מודל ACD. שיטה זו מסוכמת ומותאמת על בסיס מחקרים קודמים והשוואה עם ניסויים מרובים. בהשוואה למודלים אחרים של ACD, למודל זה יש כמה יתרונות, כגון הבדלים בודדים קטנים, תקופות ניסוי קצרות, כמות קטנה של גירוי כימי וכו '. בנוסף, מחקר זה חל על עכברים, שהם לא רק חסכוניים אלא גם יש אפשרויות רבות יותר עבור נוקאאוט גנים או הכנת עכברים טרנסגניים¹⁶. אנו מתארים גם את השיטות השונות המשמשות למעקב אחר התקדמות ACD בניסוי, כגון מדידת עובי האוזן, שימוש בצבע כחול אוונס למדידת הפרשה דלקתית ועוד. מודל זה יכול לא רק לנתח אוזני עכבר, דם, טחול ודגימות אחרות באמצעי מעבדה כדי לחקור את הפתוגנזה של ACD, אלא גם ישים להערכה פרה-קלינית של שיטות טיפוליות חדשות, שיש לה משמעות פרסומית מסוימת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

כל הטיפול והטיפול בעכברים היו בהתאם להנחיות שנקבעו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת יאנגג'ואו ואושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים תחת רישיון הפרויקט SYXK(SU) 2022-0044. במחקר זה נעשה שימוש בעכברים זכרים ונקבות BALB/c בגילאי 6-8 שבועות. כל קבוצה כללה שישה עכברים (ראו טבלת חומרים). הכלובים הוכנסו לתא מבוקר טמפרטורה (22 ± 2 מעלות צלזיוס, מחזור אור/חושך של 12 שעות) עם גישה חופשית למזון ומים. דיאגרמת זרימה ניסיונית מוצגת באיור 1.

1. הכנת בעלי חיים

התחל את הדוגמנות לאחר שבוע של התאקלמות לסביבה.
השתמשו במנורה אולטרה סגולה ובחומר חיטוי 75% אלכוהול כדי לנקות ולחטא את הסביבה ואת משטחי העבודה לפני ביצוע מניפולציה על העכברים.
הערה: על מנת למנוע השפעה של גורמים חיצוניים, לא ניתן לבצע סימון העכברים לזיהוי על אוזן העכבר; כתמים על הגב או על הזנב יכולים לשמש כחלופה.
השתמש צמר גפן קטן כדי להחיל מי סבון על הבטן של העכברים (כ 1-2^ס" מ גודל). יש לגלח את האזור בכיוון צמיחת השיער בעזרת להב או מכונת גילוח (ראו טבלת חומרים) בתחילת הדוגמנות (יום 0; איור 2A).
הערה: השימוש בסכין גילוח ישר להסרת שיער דורש מפעיל מיומן. אם לא מבוצע כראוי, הוא עלול לגרום לגירוי בעור. שקלו להשתמש בקרם מסיר שיער, קוצץ או סכין גילוח בטיחותי להסרת שיער.
שקלו את העכבר והשוו את שינויי המשקל בין כל קבוצה.

2. גירוי רגישות בטן

להבטיח החלמה מלאה של כל פציעה קלה בעור הבטן הנגרמת על ידי גילוח. יש למרוח את רגישות הבטן יומיים לאחר הגילוח (יום 2).
הכינו את תמיסת DNFB 0.5%: דללו DNFB בתערובת אצטון:שמן זית ביחס של 4:1 (למשל, 400 מיקרוליטר אצטון מעורבב עם 100 מיקרוליטר שמן זית; ראו טבלת חומרים). השתמש באקדח פיפטה כדי לנשוף ולערבב 20 פעמים כדי לערבב היטב את תמיסת DNFB. לפני כל מתן של פתרון DNFB לעכבר, לנשוף ולערבב אותו שלוש עד חמש פעמים.
הערה: הכינו את התמיסה לפני השימוש ועטפו אותה ברדיד אלומיניום כדי להגן עליה מפני אור שמש ישיר.
מרחו 25 μL של תמיסת DNFB 0.5% על העור של האזור המגולח על בטן העכברים עם פיפטור (איור 2B).
טפטפו את תמיסת ה-DNFB על אמצע אזור גילוח הבטן ופזרו קלות עם הצד החלק של קצה הפיפטור לפיזור אחיד.
בגיל 30 שניות לאחר גירוי DNFB, הניחו את העכברים בכלובים ריקים ללא מצעים כדי למנוע מהם לשפשף את תמיסת DNFB. כאשר תמיסת DNFB יבשה לחלוטין (כ-2 דקות), החזירו את העכברים לכלוב המקורי שלהם.
יש ללבוש כפפות בעת הטיפול בתמיסת DNFB מכיוון שהיא מגרה מאוד את עור האדם.

3. גירוי רגישות האוזן

הכינו תמיסת DNFB 0.2% כאמור לעיל, תמיסת הרכב (תערובת 4:1 של אצטון ושמן זית) ומים טהורים.
כיוון את גוף העכבר והפוך את הגבול החיצוני של האאוריקל כלפי מטה במהלך כל הניתוח כדי למנוע מהתמיסה להיכנס לתעלת האוזן במהלך גירוי DNFB.
בימים 4, 6, 8 ו-10, השתמשו בפיפטור כדי למרוח 20 μL של תמיסת DNFB 0.2% או תמיסת רכב לאט ובאופן אחיד על פני השטח הפנימיים של האאוריקים השמאליים של העכברים. כדי למנוע מתמיסת DNFB להיכנס לתעלת האוזן, השתמש בצד החלק של קצה הפיפטור כדי לפזר בעדינות את תמיסת DNFB במהלך הממשל. השאירו את אוזני ימין ללא טיפול (איור 2C).
המתינו עד שתמיסת DNFB יבשה והחזירו את העכברים לכלוב (כ-30 שניות).
יש ללבוש כפפות בעת הטיפול בתמיסת DNFB.

4. רישום משקל עכבר ותסמיני ACD

לשקול את העכבר כל יום, להתחיל ביום 1, ולהשוות עם המשקל המתאים שלה ביום 0; להעריך את ההשפעה של ACD על משקל הגוף של עכברים כמו שינוי משקל (g) ± שגיאת תקן של הממוצע (SEM).
צלם תמונות ברזולוציה גבוהה של אוזני העכבר כדי להקליט תסמינים קליניים של ACD כל יומיים, החל מהיום הראשון.

5. מדידת עובי האאוריקל

מדדו את עובי האאוריקל כל יומיים, החל מהיום הראשון. מדוד והקלט את שתי האוזניים בפירוט.
השתמשו בקליפרים של ורנייה (ראו טבלת חומרים) כדי למדוד את עובי האאוריקל באותה שעה בכל יום לקבלת תוצאות מדויקות (איור 3A). עצור את קליפרים vernier מלהמשיך הידוק פנימה כאשר יש חסימה קלה, כדי למנוע נזק רקמות לאוזן העכבר. שמור על המיקום קבוע ורשום את הנתונים.
אספו את העובי משלושה מיקומים שונים על כל אאוריקל (איור 3B). רשום את הממוצע של שלושת הנתונים כערך חוקי. להעריך את נפיחות האוזן במיקרומטרים (מיקרומטר) ± שגיאת תקן של הממוצע (SEM).

6. הערכת מידת הנפיחות הדלקתית

הכינו 0.5% צבע כחול אוונס (ראו טבלת חומרים) פתרון: דללו את הצבע הכחול של אוונס במי מלח חוצצים פוספט (PBS) ביום ה-11. לבשו מעיל מעבדה וכפפות בכל עת, מכיוון שהצבע הכחול של אוונס רעיל מעט לבני אדם.
לשתק את העכברים עם קיבוע: לפתוח את מכסה הקיבוע (ראה טבלת חומרים), להחזיק את זנב העכבר, לגרום לראש העכבר מול הקיבוע, ולגרום לעכבר לטפס אינסטינקטיבית לתוך הקיבוע. כסו את המכסה, גרמו לזנב העכבר לצאת מהחור במכסה וכווננו את אורך הקיבוע כך שיחשוף את זנב העכבר כולו.
נגבו את הזנב שוב ושוב עם כדור צמר גפן אלכוהולי או השרו אותו במים חמים למשך 30 שניות, וצבטו בעדינות את שורש הזנב כדי למלא ולהרחיב את הוורידים משני הצדדים. בצע את ההזרקה תחת הקרנה של מקור אור קר.
הזריקו באיטיות תמיסת צבע כחול של אוונס לווריד זנב העכבר באמצעות מחט אינסולין 1 מ"מ. המתן 15 דקות ולאחר מכן צלם את אוזני העכבר.
הערה: הנח את העכבר על השולחן והחזק אותו בעדינות כדי לחשוף את אזור האוזן לצורך רכישת תמונה. זמן קצר לאחר ההזרקה עם תמיסת הצבע הכחול של אוונס והתבוננות באינדיקציות המתאימות, השתמש בנקע צוואר הרחם כדי להרדים את העכבר.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

תחת גירוי DNFB חוזר, אוזני העכבר של קבוצת DNFB הראו תסמינים קליניים ברורים דומים ל- ACD, כאשר אזורים רגישים הראו את הסימפטומים האופייניים של אדמומיות, יובש ואפילו שחיקה והפרשה. אולם מתן אוזניים של מים טהורים (קבוצת ביקורת) או בקרת ממס (קבוצת רכב) לא הניב תסמינים דומים (איור 4).

בינתיים, בקבוצת DNFB, בהשוואה לאוזן ימין שלא טופלה, עובי האוזן השמאלית גדל באופן משמעותי לאחר גירוי DNFB (איור 5A), בעוד שלא היה הבדל משמעותי בקבוצת הביקורת ובקבוצת הרכב (איור 5B). האוזניים השמאליות של עכברי קבוצת DNFB הפכו כמובן לכחולות כהות לאחר הזרקת הצבע הכחול של אוונס ביום ה-11 לדוגמנות, שהיה שונה ויזואלית מאוזן ימין. אולם האוזניים השמאלית והימנית של עכברים בקבוצת הביקורת והרכב היו בערך באותו צבע (איור 5C).

יתר על כן, השינויים במשקל הגוף של עכברים נותחו. העלייה במשקל של עכברים הואטה מעט על-ידי DNFB או גירוי פשוט של כלי רכב (איור 6A), אולם לא הביאה לירידה משמעותית במשקל (איור 6B). במקביל, הטחול בודד מיד לאחר הקרבת העכברים. מדד הטחול חושב לפי משקל העכבר ומשקל הטחול; נוסחת החישוב הייתה כדלקמן:

מדד הטחול = משקל הטחול (גרם) / משקל הגוף (גרם) x 100

התוצאה מראה שגירוי DNFB חוזר באוזן העכבר הביא להגדלת הטחול (איור 6C) ולעלייה במדד הטחול (איור 6D), בעוד שמדד הטחול של עכברים בקבוצת הרכב לא השתנה באופן משמעותי. הוכח כי תחת גירוי של DNFB, תפקוד התגובה החיסונית של עכברים בקבוצת DNFB היה היפראקטיבי.

איור 1: דיאגרמה סכמטית של ציר הזמן של יציקת ACD. החצים מציינים מה נעשה בזמן המתאים. הפעולות הקשורות כוללות גילוח, רגישות, מדידת אוריקל, שקילה, צילום תמונות ויישום צבע כחול של אוונס. קיצורים: DNFB = 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 2: שיטת הפעולה של הקמת מודל ACD . (א) מניפולציה של גילוח הבטן. (B) מניפולציה של גירוי רגיש בבטן. (C) מניפולציה של גירוי רגיש באוזן. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 3: שיטת הערכה של נפיחות באוזניים . (A) מניפולציה של מדידות עובי האוזן בעכברים. (B) אתרי מדידת עובי האוזן בעכברים. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 4: תמונה מייצגת של השפעת מתן DNFB על אוזניהם של עכברים לאורך זמן . (A) קבוצת ביקורת. (ב) קבוצת רכב. (C) קבוצת DNFB. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 5: ההשפעה של מתן DNFB על נפיחות אוזניים בעכברים . (A) הבדל בעובי האוזן בין האוזן השמאלית והימנית של עכברים במהלך מידול. (B) השוואה של עובי אוזן שמאל ואוזן ימין של עכברים בכל קבוצה בסוף הדוגמנות. (C) השפעת מתן DNFB על חדירות כלי הדם באוזן בעכברים. (n = 6. ***p < 0.001, השוואה בין אוזניים ימין לאוזן שמאל; N.S. = לא משמעותי). כל הנתונים בוטאו כממוצע ± SEM. ניתוחי טיפול שונים בין קבוצות נותחו באמצעות מבחן t של סטודנט לא מזווג או ניתוח חד-כיווני של השונות עם המבחן של דנט. ערכי P נמוכים מ-0.05 נחשבו מובהקים סטטיסטית. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 6: השפעות של מתן DNFB על משקל הגוף ומדד הטחול בעכברים . (A) שינויים במשקל הגוף של עכברים בכל קבוצה במהלך הדוגמנות. (B) השוואה של שינויים במשקל הגוף בעכברים בכל קבוצה ביום ה-11. (C) השוואת גודל הטחול בכל קבוצת עכברים. (D) השוואת מדד הטחול בין קבוצות עכברים. (n = 6. *p < 0.05, בהשוואה לקבוצת הביקורת; N.S. = לא משמעותי). כל הנתונים בוטאו כממוצע ± SEM. ניתוחי טיפול שונים בין קבוצות נותחו באמצעות מבחן t של סטודנט לא מזווג או ניתוח חד-כיווני של השונות עם המבחן של דנט. ערכי P נמוכים מ-0.05 נחשבו מובהקים סטטיסטית. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

הפרוטוקול המתואר כאן לגרימת תסמינים דמויי ACD באוזניהם של עכברים יכול לשמש לחקר הפתופיזיולוגיה של ACD וככלי סינון לפיתוח תרופות חדשות.

ישנם שני שלבים מרכזיים לביסוס מודל ACD: רגישות ראשונית, וגירוי עוקב. הבטן היא בדרך כלל האתר של רגישות ראשונית, אבל אתר הגירוי הבא נבחר מעט אחרת. מחקרים קודמים הראו כי רוב החוקרים בוחרים להשתמש בחומרים רגישים כימיים כגון DNFB/DNCB או אוקסזולון כדי לבסס מודלים של ACD על הגב או הצוואר של עכברים, וזה בלתי נמנע להשתמש בלהבים או גוזמים כדי לנטרל את אזור המידול של עכברים^17,18,19. עם זאת, שלב זה יכול בקלות להרוס את מחסום העור ולהשפיע על הניסויים הבאים. יתר על כן, הסם המטפטף קשה לפיזור אחיד ונספג בקלות בשיער הסמוך, בשל השטח הגדול בעורף והשפעת השיער שמסביב.

בפרוטוקול ניסיוני זה, מצאנו כי ביצוע המניפולציה לגירוי עוקב במשטח הפנימי של אוריקלס עכבר איפשר לנו להקל על חלק מהצרות לעיל, ועזר לבסס מודל ACD יציב וניתן לשחזור רב. בהתאם לניסויים החוזרים שלנו²⁰, ביצענו אופטימיזציה והתאמה של מרווח הזמן בין הגירוי הרגיש לבין תקופת הניסוי. בהתאם לשיטת הניסוי הנתונה, ניתן לקבל אפקט מידול ברור מאוד ביום העשירי. בנוסף, מכיוון שאזור המידול נמצא בצד הפנימי העצמאי יחסית של האוריקל, שבו לגורמים חיצוניים יש פחות הפרעות, יש פחות הבדל בחומרת ACD בעכברים באותה קבוצת ניסוי בניסוי זה.

לפרוטוקול ניסיוני זה יש גם כמה חסרונות. ראשית, יש לבצע בזהירות מריחת חומרים רגישים כימיים על האוזן כדי למנוע חדירת כימיקלים לתעלת האוזן ופגיעה בעכברים. שנית, מודלים ACD משמשים לעתים קרובות כאמצעי לחקר גירוד כרוני בעכברים. במודל ACD שנקבע על עורפם של עכברים, ניתן היה לצפות באופן אינטואיטיבי בהתקפי הגירוד בעכברים, וניתן היה למדוד בכך את חומרת תסמין הגירוד בעכברים. למרות שהתנהגות גירוד נצפתה גם בעכברים במהלך הניסוי שלנו, לעכברים היו גם הרגלי ניקוי אוזניים ספונטניים, מה שהקשה על הבחנה בין התנהגות גירוד פתולוגית. זה הגביל את השימוש במודל זה בהתבוננות בהתנהגות גירוד הנגרמת על ידי ACD. השאלה אם הפרוטוקול ישים לסוג זה של מחקר כפופה לאימות ניסיוני נוסף.

כדי לעקוב אחר הקורס הפתולוגי של ACD, נעשה שימוש במגוון שיטות ניטור, כגון תסמיני אוזניים קליניים, מדידת עובי אוזניים והשתקפות של חדירות כלי הדם. אינדיקטורים פתולוגיים אלה נראים יותר באוזן מאשר בעור הצוואר והגב. בעת מדידת עובי האוזן של עכבר, יתרחשו טעויות מדידה עקב התנהגות נאבקת של עכבר ועובי לא אחיד של האוזן. כדי לצמצם טעויות מדידה, יש לבצע מדידות בשלושה מקומות שונים בכל אוזן. על ידי הזרקת צבע אוונס כדי להעריך את חדירות כלי הדם של האזור מודל, חומרת דרמטיטיס ניתן לראות, עם זאת, זה דורש גם שיעור הצלחה גבוה של הזרקת ורידים הזנב. אם נדרש ניתוח השוואתי נוסף, ניתן לקבוע את ספיגת הסופרנאטנט של הומוגנט רקמת האוזן של העכבר.

ראוי גם להזכיר כי במחקר הקודם שלנו²⁰, מבנה רקמת האוזן היה מאורגן היטב והושפע פחות ממבני רקמה לא מסודרים אחרים (למשל, זקיקי שיער), מאשר ברקמת העור של הצוואר והגב, מה שהוביל לבחירת אזור זה למחקר.

לסיכום, המודל של ACD המתואר במאמר זה הוא שיטת מידול יציבה ויעילה וראוי לקידום במחקרים הבאים של דרמטיטיס מגע אלרגי.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אינם מדווחים על ניגודי עניינים בעבודה זו.

Acknowledgments

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (NSFC) ל- N.-N. י' (81904212); פרויקט המדע והטכנולוגיה של הרפואה הסינית המסורתית בג'יאנגסו (YB201995); ופרויקט המימון המיוחד לפוסט-דוקטורנטים בסין (2020T130562).

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB)	Merck	200-734-3	1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene, ≥99%
Acetone	Sinopharm Chemical Reagent Co. LTD	10000418	≥99.5%
Aluminum foil	Cleanwrap	CF-2
Evans blue dye	Solarbio	314-13-6	Dye content approx. 80%
Mouse fixator	ZHUYANBANG	GEGD-SM1830
Olive oil	Solarbio	8001-25-0	500 ml
Pipet tip	Biofount	FT-200	10 - 200 μl
Pipettor	Eppendorf AG	3123000250	20 - 200 μl
Razor blade	Shanghai Gillette Co. LTD	74-S
Vernier calipers	Delixi Electric	DECHOTVCS1200