Summary
Mevcut protokol, entropi yöntemiyle birleştirilmiş bir Box-Behnken tasarım tepki yüzeyine dayanan yayla arpa şarabı ile işlenmiş Tiebangchui'nin işleme teknolojisinin optimizasyonu için etkili bir yöntem açıklamaktadır.
Abstract
Toksik etnoilaçların işlenmesi, güvenli klinik uygulamaları için büyük önem taşımaktadır. Bu nedenle, geleneksel işlemenin sınırlamaları ele alınmalı ve etnoilaçların işleme yöntemi modern araştırma yöntemleri kullanılarak standartlaştırılmalıdır. Bu çalışmada, yayla arpa şarabı ile işlenen Aconitum sarkaç Busch'un kurutulmuş kökü olan yaygın olarak kullanılan Tibet ilacı Tiebangchui'nin (TBC) işleme teknolojisi optimize edilmiştir. Değerlendirme göstergesi olarak diester-diterpenoid alkaloid (DDA) (akonitin, 3-deoksiakonitin, 3-asetilakonitin) ve monoester-diterpenoid alkaloid (MDA) (benzoylakonin) içeriği kullanılmış ve her değerlendirme indeksinin ağırlık katsayısı entropi yöntemi ile belirlenmiştir.
Yayla arpa şarabı ile TBC arasındaki oranın etkisini, TBC'nin dilim kalınlığını ve işleme süresini araştırmak için tek faktör testi ve Box-Behnken tasarımı kullanılmıştır. Entropi yöntemi ile belirlenen her indeksin objektif ağırlığına göre kapsamlı skorlama yapıldı. TBC'nin yayla arpa şarabı ile en uygun işleme koşulları aşağıdaki gibidir: yayla arpa şarabı miktarı TBC'nin beş katıdır, 24 saatlik bir ıslatma süresi ve 1,5 cm'lik bir TBC kalınlığıdır. Sonuçlar, doğrulama testi ile tahmin edilen değer arasındaki nispi standart sapmanın% 2.55'ten az olduğunu ve yayla arpa şarabı ile işlenen TBC'nin optimize edilmiş işleme teknolojisinin basit, uygulanabilir ve istikrarlı olduğunu ve bu nedenle endüstriyel üretim için bir referans sağlayabileceğini göstermiştir.
Introduction
Aconitum sarkaç Busch'un kurutulmuş kökü olan Tiebangchui (TBC), tanınmış bir Tibet tıbbıdır ve başlangıçta klasik Tibet tıp kitabı "Dört Tıbbi Tantra"1,2'de kaydedilmiştir. "Çin Halk Cumhuriyeti Sağlık Bakanlığı İlaç Standartları (Tibet Tıbbı)" na göre, TBC soğuk algınlığını atmada, ağrıyı hafifletmede, rüzgarı dağıtmada ve şoku sakinleştirmede etkilidir ve kliniklerde romatoid artrit tedavisinde yaygın olarak kullanılır 3,4,5.
TBC esas olarak yüksek derecede toksik diester-diterpenoid alkaloidler (DDA'lar) ve orta derecede toksik monoester-diterpenoid alkaloidler (MDA'lar) dahil olmak üzere alkaloitler içerir6,7,8. Bu kimyasal bileşenler tıbbi etkileri olan aktif bileşenlerdir, ancak toksiktir. En ünlü aktif ve toksik bileşenlerden biri olan aconitine, 1 mg9'u aştığında zehirlenmeye neden olur. Bu nedenle, TBC'nin yanlış veya aşırı kullanımı zehirlenme ve hatta ölümle sonuçlanabilir ve TBC'nin toksisite zayıflaması ve etkinlik rezervi, güvenli klinik uygulaması için çok önemlidir10,11.
İşleme, TBC'yi detoksifiye etmek için etkili bir yöntemdir. Eski Tibet tıp kitaplarına göre, yayla arpa şarabı ile işleme, toksisiteyi azaltmanın ve TBC'nin etkinliğini korumanın etkili bir yoludur. TBC, yayla arpa şarabına batırılır, bir gece saklanır, kurutulur ve ilaçlara eklenir12. Bununla birlikte, spesifik işleme teknolojisi ve potansiyel etkileyen faktörler nadiren rapor edilir ve geleneksel işleme süreci genellikle deneyime dayanır ve standartlaştırılmış yöntemlerden yoksundur. Bu nedenle, işleme sürecini optimize etmek ve standartlaştırmak için modern bilimsel ve teknolojik yöntemlere ihtiyaç vardır.
Box-Behnken tasarım yöntemi, farklı faktörler arasındaki etkileşimleri ve bunların ikinci dereceden polinom uydurma yoluyla kapsamlı puanlama üzerindeki etkilerini araştırmak için kullanılır. Bu tasarım, optimal koşulların sezgisel olarak gözlemlenmesini sağlar ve eczacılık alanında yaygın olarak kullanılmaktadır13. Örneğin, entropi yöntemine dayanan Box-Behnken tasarım yöntemi, Curcuma Longa Radix 14 sirkesi ile kızartma işleme teknolojisini başarıyla optimize etti. Bu çalışmada, entropi yöntemi ile birleştirilen Box-Behnken tepki yüzeyi deneysel tasarımı, yayla arpa şarabı ile işlenen TBC'nin işleme teknolojisinin optimize edilmesinde kullanılmıştır. Optimize edilmiş işleme teknolojisinin kalite kontrol ve güvenli klinik kullanım sağlaması beklenmektedir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Bu çalışmada, yayla arpa şarabı ile işlenen TBC'nin işleme teknolojisi, entropi yöntemi ile birleştirilmiş bir Box-Behnken tasarımı ile optimize edilmiştir. Değerlendirme göstergesi olarak DDA ve MDA içeriği kullanılmış ve her bir değerlendirme indeksinin ağırlık katsayısı entropi yöntemi ile belirlenmiştir.
1. Deneysel hazırlık
- Yayla arpa şarabı hazırlayın15.
- 500.00 g siyah yayla arpa pirinci alın ve beş kat daha fazla su ekleyin. Pirinci kalan su emilene kadar pişirin (~ 2 saat). Dökün, sıcaklık 37 ° C'ye düşene kadar bekleyin, 4 g Jiuqu ekleyin ( Malzeme Tablosuna bakınız), iyice karıştırın, kutuyu kapatın, kabı pamuk yünü ile sarın ve 7 gün boyunca güveç bırakın.
- 7. günde 300 mL su ekleyin ve tekrar kapatın. 8. günde, şarabı çıkarmaya başlayın ve daha sonra 300 mL su ile değiştirin. 1 gün boyunca kapatın ve fermente edin, şarabı alın ve tekrar 300 mL su ekleyin. Bu prosedürü üç kez tekrarlayın ve likörleri birleştirin.
- Kaynatın, sonra ısıyı bir kaynamaya düşürün ve kalan su emilene kadar pişirmeye devam edin.
- İşlenmiş ürünler hazırlamak için, TBC'yi bir kapta doğru bir şekilde tartın, yayla arpa şarabı ekleyin ve 1 gün bekletin. Daha sonra, sabit bir sıcaklıkta elektrikli kurutma fırınında kurutun.
NOT: Alkaloid bileşimindeki değişiklikleri önlemek için kurutma sıcaklığı 40 °C'den az olmalıdır. - Test numunesi çözeltisi hazırlayın.
- TBC işlenmiş ürün tozunu (2 g) konik bir şişede doğru bir şekilde tartın, %40 amonyak çözeltisi ekleyin ve izopropanol-etil asetat (1:1) karışık çözücüler (50 mL) (güç: 200 W; frekans: 40 kHz; sıcaklık: 40 °C) ile 30 dakika boyunca ultrason destekli ekstraksiyon gerçekleştirin.
NOT:% 40 amonyak çözeltisi hazırlamak için, 40 mL amonyağı 100 mL'lik hacimsel bir şişeye aktarın ve ardından saf suyla seyreltin. - Bir izopropanol-etil asetat karışımı (1:1 v/v) ekleyerek ekstrakte edilen çözeltiyi orijinal ağırlığa ayarlayın.
- Özütlenen çözeltiyi (25 mL), çözücünün kuruyana kadar düşük basınç altında geri kazanımı için yuvarlak tabanlı bir şişeye doğru bir şekilde aktarın.
- Son olarak, kalıntıyı adım 1.3.3'ten 5 mL'lik bir hacimsel şişede çözmek için% 0.05 hidroklorik asit-metanol çözeltisini aktarın ve% 0.05 metanol hidroklorür çözeltisi ile seyreltin. Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) sistemlerine enjeksiyondan önce çözeltiyi 0,22 μm mikro gözenekli membran filtresinden geçirin.
NOT: 100 mL'lik bir hacimsel şişeye 0,05 mL hidroklorik asit ekleyerek %0,05 metanol hidroklorür asit hazırlayın, ardından metanol ile seyreltin.
- TBC işlenmiş ürün tozunu (2 g) konik bir şişede doğru bir şekilde tartın, %40 amonyak çözeltisi ekleyin ve izopropanol-etil asetat (1:1) karışık çözücüler (50 mL) (güç: 200 W; frekans: 40 kHz; sıcaklık: 40 °C) ile 30 dakika boyunca ultrason destekli ekstraksiyon gerçekleştirin.
- 5.18 mg benzoylakonin, 13.13 mg akonitin, 10.05 mg 3-deoksiakonitin ve 10.09 mg 3-asetilakonitin tartarak standart bir çözelti hazırlayın ve ardından katıları ayrı ayrı 5 mL'lik bir hacimsel şişeye yerleştirin. % 0.05 metanol hidroklorür çözeltisi ile seyreltin.
2. Kromatografik durum
- HPLC için Tablo 1'de gösterildiği gibi kromatografik koşulları ayarlayın. Kullanılan aletlerin detayları Malzeme Tablosunda verilmiştir.
3. Sistem uyarlanabilirlik testi
- Doğrusallık aralığı
NOT: İlk olarak, numunedeki benzoylakonitin, akonitin, 3-deoksiakonitin ve 3-asetilakonitinin tepe alanlarını belirlemek için HPLC'yi kullandık ve daha sonra bilinen bir standart çözelti konsantrasyonunun tepe alanını rastgele belirledik. Daha sonra, farklı numunelerde benzoylakonitin, akonitin, 3-deoksiakonitin ve 3-asetilakonitin konsantrasyonunu tahmin etmek için iki tepe alanı (numune çözeltisi ve standart çözelti) arasındaki farkı karşılaştırdık ve daha sonra standart çözeltiyi, numunenin eğrideki konsantrasyonunu içerecek şekilde doğrusal bir aralığa ayarladık. Standart eğri konsantrasyonları Tablo 2'de gösterilmiştir.- 1.036 mg / mL, 0.518 mg / mL, 0.2072 mg / mL, 0.1036 mg / mL ve 0.0518 mg / mL içeren benzoylakonitin referans çözeltileri hazırlayın.
- 1.313 mg / mL, 0.5252 mg / mL, 0.2626 mg / mL, 0.1313 mg / mL ve 0.05252 mg / mL içeren akonitin referans çözeltileri hazırlayın.
- 1.005 mg / mL, 0.5025 mg / mL, 0.201 mg / mL, 0.1005 mg / mL ve 0.402 mg / mL içeren 3-deoksiakonitin referans çözeltileri hazırlayın.
- 0.2018 mg / mL, 0.1009 mg / mL, 0.04036 mg / mL, 0.02018 mg / mL ve 0.01009 mg / mL içeren 3-asetilakonitin referans çözeltileri hazırlayın.
- Enjeksiyon konsantrasyonuna karşı tepe alanını çizerek her bileşiğin doğrusallığını araştırın.
- Hassasiyet testini gerçekleştirmek için, her referans çözeltisinden 10 μL'sini HPLC sistemine günde altı kez enjekte edin ve numuneleri çalıştırmak için adım 2.1'de açıklanan aynı HPLC koşullarını kullanın Her bileşenin tepe alanını kaydedin.
- Hazırlanan numune çözeltisinin 10 μL'sini adım 1.3 ile enjekte ederek gün içi stabilite testi yapın ve 0 saat, 2 saat, 4 saat, 8 saat, 14 saat, 12 saat ve 24 saat16'dan sonra tepe alanlarını belirleyin.
- Adım 1.3'e göre test numunesi çözeltisini hazırlamak için aynı TBC partisinden altı numune alarak bir tekrarlanabilirlik testi gerçekleştirin. HPLC sistemine her numuneden 10 μL enjekte edin ve numuneleri adım 2.1'de açıklandığı gibi çalıştırın.
- Yöntemin doğruluğunu değerlendirmek için kurtarma testini gerçekleştirin. Geri kazanım oranını hesaplamak için sırasıyla test çözeltisine her bir indeks bileşeninin (benzoylaconitine, aconitine, 3-deoksiakonitin ve 3-asetilakonitin) standart çözeltisinin% 100'ünü ekleyin. Örneğin, TBC numunesinde benzoylakonitin içeriği 0,1524 mg/mL olduğundan, 0,1524 mg benzoylakonitin standartlarını doğru bir şekilde tartın ve TBC numunesine ekleyin, ardından test numunesi çözeltisini adım 1.3'e göre hazırlayın. Bu örnekleri, adım 2.1'de açıklanan HPLC koşullarıyla çalıştırın. Denklem (1)'i kullanarak geri kazanım oranını hesaplayın:
(1)
Burada, A, numune çözeltisinde ölçülecek bileşen miktarıdır (benzoylaconitine, aconitine, 3-deoxyaconitine veya 3-acetylaconitine), B standart eklenen miktardır (benzoylaconitine, aconitine, 3-deoxyaconitine veya 3-acetylaconitine) ve C, standart çözeltiyi ve numune çözeltisini içeren çözeltinin ölçülen değeridir (bkz. Tablo 3). Yukarıdaki adımları gerçekleştirmek üzere kromatografik koşullar için adım 2.1'e bakın. Geri kazanım oranı, numune analizi sırasında hedef bileşenin (benzoylaconitine, aconitine, 3-deoxyaconitine veya 3-acetylaconitine) kayıp derecesini yansıtır; Kurtarma oranı ne kadar yüksek olursa, hedef bileşenin kaybı da o kadar düşük olur.
(1)4. Yayla arpa şarabı ile işlenmiş TBC'nin tek faktörlü testi
NOT: Yayla arpa şarabı ve TBC arasındaki oran, TBC'nin dilim kalınlığı ve ıslatma süresi, yayla arpa şarabı17 ile işlenen TBC sırasında TBC'de daha toksik bileşenlerin (akonitin, 3-deoksiakonitin ve 3-asetilakonitin) çözünmesini etkileyecektir. Tek faktör testi ve Box-Behnken tasarımı, yayla arpa şarabının TBC'ye oranının, TBC'nin dilim kalınlığının ve ıslatma süresinin etkisini araştırmak için kullanılmıştır.
- Yayla arpa şarabı ekleme testini (A), her biri 30 g TBC içeren beş test grubu oluşturarak, yayla arpa şarabı miktarının tarifteki TBC miktarının iki, üç, dört, beş ve altı katı olduğu yerde gerçekleştirin. Islatma süresi 12 saattir ve dilimler 1.0 cm kalınlığında18'dir.
NOT: Aynı koşul testinin her grubu üç paralel grupta işlenmelidir. - Islatma süresi testini (B), her biri 30 g TBC içeren beş test grubu oluşturarak gerçekleştirin. Islatma süreleri 12 saat, 24 saat, 36 saat ve 48 saattir. Yayla arpa şarabı miktarı TBC'nin beş katıdır ve dilimler1.0 cm kalınlığında 19'dur.
NOT: Aynı koşul deneyinin her grubu üç paralel grupta işlenmelidir. - Dilimleme kalınlığı testini (C), her biri 30 g TBC'ye sahip beş test grubu oluşturarak gerçekleştirin. Dilimler 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 ve 2.5 cm kalınlığında, ıslatma süresi 24 saat ve yayla arpa şarabı miktarı TBC20'nin beş katıdır.
NOT: Aynı koşul deneyinin her grubu üç paralel grupta işlenmelidir. - Adım 1.3'e göre test numunesi çözeltisi hazırlamak için her test grubu için işlenmiş ürünleri doğru şekilde tartın. HPLC ile her numunenin tepe alanını belirleyin ve MDA'ların ve DDA'ların miktarlarını tahmin etmek için standart eğriyi kullanın. Standart eğride, y tepe alanıdır ve x içeriktir. MDA'ların içeriği benzoil akonitindir ve DDA'ların içeriği akonitin, 3-deoksiakonitin ve 3-asetilakonitin toplamıdır.
- DDA'ların toplam içeriğini ve MDA'ların içeriğini değerlendirme göstergeleri olarak kullanın ve her bir değerlendirme indeksinin ağırlık katsayısını ve entropi yöntemiyle kapsamlı puanlamayı belirleyin (bölüm 5).
DİKKAT: TBC toksiktir ve bu nedenle işleme sırasında koruyucu önlemler alınmalıdır.
5. Kapsamlı puanlamayı hesaplamak için entropi yöntemi
NOT: Tek faktörlü testte dilimleme kalınlığı testinin deneysel verilerini, hesaplama sürecini detaylı bir şekilde göstermek için örnek olarak kullanmaktayız. MDA'ların ve DDA'ların içeriğini hesaplamak için Ek Tablo S1'deki her numunedeki bileşenlerin tepe alanını ve Tablo 2'deki standart eğriyi kullanırız (bkz. Doğrusal denklemde, y tepe alanıdır ve x içeriktir. Bu çalışmada pozitif gösterge olarak orta derecede toksik MDA (benzoylaconitine), negatif gösterge olarak ise yüksek toksisiteye sahip DDA'ların (akonitin, 3-deoksiakonitin ve 3-asetylakonitin) toplam içeriği kullanılmıştır. MDA'ların içeriği benzoil akonitindir ve DDA'ların içeriği akonitin, 3-deoksiakonitin ve 3-asetilakonitin toplamıdır. Her örneklemin iki değerlendirme göstergesi vardır: i = 1,2,...,n ve j = 1,2,... m21.
- MDA22'nin içeriğini standartlaştırmak için Denklem (2) kullanın.
(2)
Böyle
NOT: Xij, i-th örneğinin j-th göstergesinin değeridir. Xij*, Xij'in standartlaştırılmış değeridir. Örneğin, i = 3 ve j = 1, X31, üçüncü numunenin ilk göstergesinin değerini temsil eder ve
üçüncü numunedeki ilk göstergenin standartlaştırılmış değeridir. Ek Tablo S3'te gösterilmiştir. 
- DDA'ların toplam içeriğini standartlaştırmak için Denklem (3)kullanın 23.
(3)
NOT: Burada, i = 3, j = 2, üçüncü örneğin ikinci göstergesini temsil eder.
üçüncü numunedeki ikinci göstergenin standartlaştırılmış değeridir. 
Ek Tablo S3'te gösterilmiştir. - Her gösterge23'ün entropi değerini (Hj) tanımlamak için Denklemleri (4) ve (5) kullanın.
- Denklemi kullanarak i-th değerlendirme göstergesi Pij altında j-th denemesinin olasılığını hesaplayın (4).
(4)
3 numara için,
NOT: Üçüncü örneklemin birinci göstergesi ve ikinci göstergesi için olasılık değerleri sırasıyla 0,2374 ve 0,2812'dir.
Ek Tablo S3'te gösterilmiştir. - Bilgi entropisini hesaplayın Hj.
(5)
NOT: H1, dilimleme kalınlığı testinde birinci göstergenin (MDA) entropisidir ve H2, ikinci göstergenin (DDA'lar) entropisidir.
- Denklemi kullanarak i-th değerlendirme göstergesi Pij altında j-th denemesinin olasılığını hesaplayın (4).
- Gösterge ağırlıklarını (Wj)23 hesaplamak için Denklem (6)'yı kullanın.
(6)
= %33,3
= %66,7
NOT: Wj, her göstergenin ağırlık katsayısıdır. Dilimleme kalınlığı testinde, pozitif göstergenin (MDA) ve negatif göstergenin (DDA'lar) ağırlık katsayısı sırasıyla% 33.3 ve% 66.7'dir. - 23 göstergelerinin kapsamlı puanlamasını hesaplamak için Denklem (7)'yi kullanın.
(7)
3 numara için,
NOT: Si, her numunenin kapsamlı puanlamasıdır. Box-Behnken tasarımında merkezi nokta olarak en yüksek puanı almamız gerekiyor. S 1, S 2, S 3, S 4 ve S5, Ek Tablo S3'te gösterilmiştir.
(2)
üçüncü numunedeki ilk göstergenin standartlaştırılmış değeridir. Ek Tablo S3'te gösterilmiştir. 
(3)
üçüncü numunedeki ikinci göstergenin standartlaştırılmış değeridir. 
Ek Tablo S3'te gösterilmiştir.
(4)
Ek Tablo S3'te gösterilmiştir.
(5)
(6)
= %33,3
= %66,7
(7)
6. Kutu-Behnken tasarımı
- Tek faktörlü test yoluyla, yanıt yüzeyinin merkez noktası olarak en yüksek kapsamlı puanlamaya sahip koşulu kullanın (bkz. Tablo 4, Tablo 5, Tablo 6 ve Şekil 2). Yayla arpa şarabı miktarını (A), ıslatma süresini (B) ve TBC'nin (C) dilim kalınlığını etkileyen faktörler olarak ve kapsamlı puanlamayı yanıt değeri24 olarak kullanın.
NOT: Tablo 4, Tablo 5 ve Tablo 6'daki tek faktörlü verilere dayanarak, en yüksek kapsamlı puanlama bölüm 5'teki (2), (3), (4), (5), (6) ve (7) numaralı denklemlerle hesaplanır ve en iyi nokta elde edilir. Yayla arpa şarabı miktarı TBC'nin beş katıydı, ıslatma süresi 36 saat ve dilimleme kalınlığı 1.0 cm idi.
7. Box-Behnken tasarım yazılımı çalışma adımları
- Yazılımı açın (bkz . Malzeme Tablosu) ve Yeni Tasarım | Kutu-Behnken Tasarımı (bkz. adım 5.1; Ek Dosya 1).
- Etkileyen faktörlerin sayısını girin ve seviye bilgilerini girin (üç seviyeli-üç faktörlü; bkz. Tablo 7). Box-Behnken tasarımı bu çalışmada 17 deneyden oluşmaktadır. Son olarak, Devam'ı tıklatın (bkz. adım 5.2; Ek Dosya 1).
- Yanıt olarak bölüm 5'teki (2), (3), (4), (5), (6) ve (7) denklemlerine göre kapsamlı puanlamayı (Y) ayarlayın. Yanıt değerlerinin sayısını girin (resim yalnızca bir yanıt değeri gösterir) ve Son'u tıklatın (bkz. adım 5.3; Ek Dosya 1).
- TBC'yi tasarım sonuçlarına göre yayla arpa şarabı ile işleyin ve tepki yüzeyi için tasarlanmış 17 senaryoya dayanarak deneyi tamamlayın.
- Adım 1.3'ü izleyerek örnek çözümleri hazırlayın ve HPLC sistemi tarafından MDA'ların ve DDA'ların toplam içeriğini hesaplayın.
- Adım 5'te her grup için (2), (3), (4), (5), (6) ve (7) numaralı denklemlerle kapsamlı puanlamayı hesaplayın ve puan sonuçlarını girin (bkz. adım 5.4; Ek Dosya 1).
- Tarih ve model bilgilerini çözümlemek için analiz et'i tıklatın (bkz. adım 5.4.1; Ek Dosya 1).
- Yazılım tarafından elde edilen 3D model grafiklerinde çizilen polinom denklemlerinin istatistiksel doğrulamasını ve tepki yüzeyi analizini gerçekleştirin.
- Üst menüdeki ANOVA'ya tıklayın ve sonuç tablosunu gözlemleyin.
- Tahmin edilen optimum proses koşullarını görüntülemek için Optimizasyon'a tıklayın (bkz. adım 5.4.2; Ek Dosya 1).
8. Doğrulama testi
- Box-Behnken tepki yüzeyi tasarımından tahmin edilen sonuçlara göre, adım 7.3'te TBC'nin optimal işleme koşulunu tanımlayın. Burada şu şekildedir: TBC, yayla arpa şarabının beş katı miktarında 24 saat bekletilir ve TBC'nin kalınlığı 1,5 cm'dir. İşleme koşulları olarak en uygun etkileyen faktör seviyesini alın ve işleme teknolojisinin kararlılığını doğrulamak için üç paralel deney seti oluşturun.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu çalışmada, TBC'nin hassasiyeti, kararlılığı, tekrarlanabilirliği ve numune geri kazanımı, yöntemin uygulanabilir olduğunu göstermiştir. TBC'deki dört indeks bileşeni, belirli bir konsantrasyon aralığında iyi bir doğrusal ilişkiye sahipti. Tipik kromatogramlar Şekil 1'de gösterilmiştir. Hassasiyet testi sonuçları (Tablo 8), pik bölgelerin nispi standart sapmasının (RSD) benzoylakonin, akonitin ve 3-deoksiakonitin için sırasıyla% 2.56,% 1.49 ve% 2.03 ve 3-asetilakonitin için% 0.21 olduğunu göstermiştir. cihazın hassasiyetinin iyi olduğunu göstermektedir. 24 saat boyunca yapılan stabilite çalışması (n = 6), benzoylakonin, akonitin, 3-deoksiakonitin ve 3-asetilakonitin için sırasıyla% 2.76,% 2.21,% 2.98 ve% 2.31 nispi standart sapma değerlerini göstermiştir (Tablo 9), bu da örnek çözeltinin 24 saat boyunca kararlı olduğunu düşündürmektedir. Tekrarlanabilirlik testi sonuçları (Tablo 10), benzoylakonin, akonitin, 3-deoksiakonitin ve 3-deoksiakonitinin pik alanlarının RSD'lerinin sırasıyla% 2.80,% 2.92,% 2.92 ve% 2.07 olduğunu ve bu yöntemin tekrarlanabilirliğinin iyi olduğunu göstermiştir. İyileşme deneyi sonuçları, benzoylakonin, akonitin, 3-deoksiakonitin ve 3-deoksiakonitinin ortalama iyileşme oranlarının sırasıyla% 99.7,% 100.84,% 103.27 ve% 100.92 olduğunu göstermiştir.
Yayla arpa şarabı ile işlenen TBC'nin tek faktörlü testi, yayla arpa şarabı miktarının TBC'nin beş katı, ıslatma süresinin 36 saat ve dilimleme kalınlığının 1.0 cm olduğunu ortaya koymuştur (Şekil 2). Tepki yüzeyi modelinin deneysel tasarımı ve sonuçları Tablo 11'de gösterilmiştir. Deneysel ANOVA'nın sonuçları Tablo 12'de gösterilmiştir. Faktörler, ikinci dereceden bir multinomial regresyon denklemi elde etmek için regresyon ile donatılmıştır (8). C: Yayla arpa şarabı ilavesi; B: ıslatma süresi; C: dilimleme kalınlığı. Sonuçlar, modelin iyi bir şekilde oturduğunu ve yayla arpa şarabı ilavesinin kapsamlı puanlaması, ıslatma süresi ve dilim kalınlığı arasındaki ilişkiyi tahmin edebildiğini gösterdi. Faktörlerin etkilerin gücüne göre sırası, ıslanma süresi > şifalı bitkilerin dilim kalınlığı > yayla arpa şarabı ilavesiydi.
(8)
Denklem (8)'e göre, Design-Expert 8.0.6 analiz yazılımı, adım 7.2.1 aracılığıyla bir 3D eğri çizmek için kullanılır (Şekil 3). Tepki yüzeyinin daha dik bir eğimi, faktörlerin daha güçlü bir yatay etkileşimini gösterir ve daha yumuşak bir eğim bunun tersidir. Tablo 12'deki modelin p değeri (p < 0.0001), modelin iyi bir uyum sağladığını ve yayla arpa şarabı ilavesi, ıslatma süresi, şifalı bitkilerin dilim kalınlığı arasındaki ilişkiyi daha iyi yansıttığını gösteren 0.9754'lük bir R2 ve anlamlı olmayan bir uyumsuzluk terimi (p = 0.7253) ile modelin anlamlı olduğunu göstermektedir. ve genel puan.
Analitik entropi yöntemi ile belirlenen her indeksin objektif ağırlığına göre kapsamlı puanlama yapılmış ve TBC'nin optimal işleme koşulu şu şekilde belirlenmiştir: TBC, yayla arpa şarabı miktarının beş katında 24 saat bekletilir ve TBC'nin kalınlığı 1,5 cm'dir. Doğrulama testi sonuçları, toplam DDA'ların sırasıyla 0.6963, 0.6793 ve 0.7023 mg / g olduğunu ve üç paralel test setindeki MDA içeriğinin 0.2096, 0.2237 ve 0.2109 mg / g olduğunu göstermiştir. Ortalama kapsamlı puanlama 83 idi. Doğrulama testi ile tahmin edilen değer arasındaki RSD% 1.8'den azdı, bu da yayla arpa şarabı ile işlenen TBC'nin optimize edilmiş işleme teknolojisinin basit, uygulanabilir ve istikrarlı olduğunu ve endüstriyel üretim için bir referans sağladığını gösteriyor.
Şekil 1: Adım 2.1'de belirtilen kromatografik koşulları ayarladıktan sonra dört karakteristik bileşenin temsili kromatogramları (n = 1). (A) Referans çözeltinin tipik kromatogramları. Tepe 1 benzoylakonin, tepe 2 akonitin, tepe 3 3-deoksiakonitin ve tepe 4 3-asetilakonitindir. (B) Numune çözeltisinin tipik kromatogramları. Tepe 1 benzoylakonin, tepe 2 akonitin, tepe 3 3-deoksiakonitin ve tepe 4 3-asetilakonitindir. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: Yayla arpa şarabı ile işlenen TBC'nin tek faktörlü testinin kapsamlı puanlaması (n = 3). (A) Yayla arpa şarabı miktarı (zamanlar); (B) Islanma süresi (h); (C) Dilim kalınlığı (cm). Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 3: Çeşitli faktörlerin etkileşiminin kapsamlı puanlama üzerindeki etkisinin 3B tepki yüzeyi haritası. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
| Koşul | Parametre |
| Kromatografik sütun | Üstün ODS-3 C18 (4,6 mm x 250 mm, 5 μm) |
| Mobil faz | Asetonitril (A) - 0.04 mol/L amonyum asetat çözeltisi (B) pH= 8.5 ± 0.5 |
| Degrade elüsyonu | 0–10 dakika, %0-%70 A; 10–15 dk, %70–50 A; 15–30 dk, %50–40 A; 30–38dk, %40–15 A; 38–45 dakika, %15–15 A; 45–55 dakika, %15–70 A |
| Akış hızı | 1 mL/dak |
| Kolon sıcaklığı | 30 °C |
| Dalga boyunu algılama | 235 mil |
| Örnek hacim | 10 μL |
Tablo 1: Bu deneyde belirlenen kromatografik koşullar. Kromatografik sütun, mobil faz, gradyan seyreltmesi, akış hızı, sütun sıcaklığı, algılama dalga boyu ve numune hacmi hakkında ayrıntılar.
| Dizin bileşenleri | Doğrusal denklem | Doğrusallık aralığı (mg/mL) | S2 |
| Benzoylakonun | y=11.658.706,1677x +19.717,0872 | 1.036-0.0518 | 0.9995 |
| Akonitin | y=11.199.784,3030x -67.641,2429 | 1.313-0.05252 | 0.9999 |
| 3-Deoksiakonitin | y=11.214.550,3140x +59.795,9119 | 1.005-0.0402 | 0.9999 |
| 3-Asetilakonitin | y=9.887.511,9074x +26.713,6359 | 0.2018-0.01009 | 0.9994 |
Tablo 2: TBC'deki indeks bileşenlerinin doğrusal ilişkisi. TBC'deki dört indeks bileşeni, belirli bir konsantrasyon aralığında iyi bir doğrusal ilişkiye sahipti.
| Dizin bileşenleri | Bilinen içerik (mg) | Miktar ekleme (mg) | Ölçüm miktarı (mg) | Toparlanmalar (%) | Ortalama geri kazanımlar (%) | RSD (%) |
| Benzoylakonun | 0.1558 | 0.1295 | 0.2901 | 96.4 | 99.7 | 3.14 |
| 0.1574 | 0.1295 | 0.2849 | 98.46 | |||
| 0.156 | 0.1295 | 0.2871 | 101.24 | |||
| 0.1574 | 0.1295 | 0.2923 | 104.95 | |||
| 0.1449 | 0.1295 | 0.2736 | 99.38 | |||
| 0.1566 | 0.1295 | 0.2839 | 98.3 | |||
| Akonitin | 0.3099 | 0.3283 | 0.645 | 102.07 | 100.84 | 2.02 |
| 0.3153 | 0.3283 | 0.6371 | 98.02 | |||
| 0.2928 | 0.3283 | 0.6314 | 103.14 | |||
| 0.2969 | 0.3283 | 0.6325 | 102.23 | |||
| 0.3035 | 0.3283 | 0.6343 | 100.76 | |||
| 0.3094 | 0.3283 | 0.6339 | 98.84 | |||
| 3-Deoksiakonitin | 0.1789 | 0.201 | 0.3788 | 99.45 | 103.27 | 2.65 |
| 0.1793 | 0.201 | 0.3845 | 102.09 | |||
| 0.1741 | 0.201 | 0.3774 | 101.14 | |||
| 0.1635 | 0.201 | 0.3753 | 105.37 | |||
| 0.1708 | 0.201 | 0.383 | 105.57 | |||
| 0.1653 | 0.201 | 0.3783 | 105.97 | |||
| 3-Asetilakonitin | 0.0169 | 0.02 | 0.0374 | 102.5 | 100.92 | 1.15 |
| 0.0168 | 0.02 | 0.037 | 101 | |||
| 0.0166 | 0.02 | 0.0366 | 100 | |||
| 0.0161 | 0.02 | 0.0365 | 102 | |||
| 0.017 | 0.02 | 0.0369 | 99.5 | |||
| 0.0171 | 0.02 | 0.0372 | 100.5 |
Tablo 3: Numune geri kazanım hızı ölçümünün sonuçları. Benzoylakonin, akonitin, 3-deoksiakonitin ve 3-asetilakonitinin geri kazanım oranının RSD'si sırasıyla% 3.14,% 2.02,% 2.65 ve% 1.15 idi.
| Sayı | Yayla arpa şarabı ekleme testi (zamanlar) | MDA'ların içeriği (mg/g) | DDA'ların içeriği (mg/g) | Kapsamlı puanlama/puan |
| 1 | 2 | 0.1875 | 0.8254 | 58.98421777 |
| 2 | 3 | 0.1099 | 0.9847 | 0.056898711 |
| 3 | 4 | 0.2296 | 0.8487 | 71.12048666 |
| 4 | 5 | 0.2161 | 0.6894 | 94.6966946 |
| 5 | 6 | 0.2006 | 0.7472 | 78.22537224 |
Tablo 4: Yayla arpa şarabı ile TBC arasındaki oranın tek faktörlü testinin sonuçları.
| Sayı | Islatma süresi testi (h) | MDA'ların içeriği (mg/g) | DDA'ların içeriği (mg/g) | Kapsamlı puanlama/puan |
| 1 | 6 | 0.236292609 | 1.047811476 | 59.67501032 |
| 2 | 12 | 0.193880685 | 1.164420534 | 23.10718817 |
| 3 | 24 | 0.229606225 | 0.848736346 | 53.86313899 |
| 4 | 36 | 0.151447388 | 0.701045217 | 79.15664943 |
| 5 | 48 | 0.193311963 | 0.767427412 | 68.88872066 |
Tablo 5: Islatma süresinin tek faktörlü testinin sonuçları.
| Sayı | Dilimleme kalınlığı testi (cm) | MDA'ların içeriği (mg/g) | DDA'ların içeriği (mg/g) | Kapsamlı puanlama/puan |
| 1 | 0.5 | 0.1043 | 0.6190 | 66.96 |
| 2 | 1 | 0.1709 | 0.6992 | 75.05 |
| 3 | 1.5 | 0.1507 | 0.6954 | 66.23 |
| 4 | 2 | 0.1459 | 0.8347 | 20.66 |
| 5 | 2.5 | 0.1451 | 0.8298 | 21.79 |
Tablo 6: TBC'nin dilim kalınlığının tek faktörlü testinin sonuçları.
| Düzey | Etken | ||
| A (yayla arpa şarabı miktarı, zamanlar) | B (ıslatma süresi, h) | C (dilim kalınlığı, cm) | |
| 1.0000 | 4.0000 | 24.0000 | 0.5000 |
| 2.0000 | 5.0000 | 36.0000 | 1.0000 |
| 3.0000 | 6.0000 | 48.0000 | 1.5000 |
Tablo 7: Box-Behnken tasarım tepkisi yüzey seviyesi faktör tablosu.
| İndeks bileşenlerinde tepe alanı | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD (%) |
| Benzoylakonun | 1281252 | 1290912 | 1198912 | 1256056 | 1256704 | 1266738 | 2.56% |
| Akonitin | 2861208 | 2881686 | 2785022 | 2790990 | 2859024 | 2799395 | 1.50% |
| 3-Deoksiakonitin | 2356317 | 2328383 | 2429059 | 2350987 | 2406114 | 2450374 | 2.04% |
| 3-Asetilakonitin | 2008110 | 2021560 | 2014519 | 2015881 | 2015209 | 2012529 | 0.22% |
Tablo 8: Hassas ölçüm sonuçları. Benzoylakonin, akonitin, 3-deoksiakonitin ve 3-asetilakonitinin pik alanlarının RSD'si sırasıyla% 2.56,% 1.49,% 2.03 ve% 0.22 idi (n = 6).
| İndeks bileşenlerinde tepe alanı | 0 | 2 | 4 | 8 | 12 | 24 | RSD (%) |
| Benzoylakonun | 191657 | 189590 | 193934 | 205135 | 196159 | 195954 | 2.76 |
| Akonitin | 312259 | 310240 | 294331 | 309104 | 312199 | 305360 | 2.22 |
| 3-Deoksiakonitin | 230174 | 246787 | 239760 | 249302 | 248806 | 243396 | 2.98 |
| 3-Asetilakonitin | 17086 | 16953 | 16826 | 16914 | 16979 | 17896 | 2.31 |
Tablo 9: Kararlılık testinin sonuçları. Benzoylakonin, akonitin, 3-deoksiakonitin ve 3-asetilakonitinin pik alanlarının RSD'si sırasıyla% 2.76,% 2.21,% 2.98 ve% 2.31 idi (n = 6).
| İndeks bileşenlerinin tepe alanı | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD (%) |
| Benzoylakonun | 191067 | 192795 | 191058 | 192907 | 179103 | 192008 | 2.79 |
| Akonitin | 308142 | 313754 | 290487 | 294740 | 301515 | 307654 | 2.92 |
| 3-Deoksiakonitin | 249021 | 249456 | 243963 | 232781 | 240524 | 234661 | 2.92 |
| 3-Asetilakonitin | 17465 | 17451 | 17247 | 16691 | 17608 | 17686 | 2.07 |
Tablo 10: Tekrarlanabilirlik testinin sonuçları. Benzoylakonin, akonitin, 3-deoksiakonitin ve 3-asetilakonitinin pik alanlarının RSD'si sırasıyla% 2.79,% 2.92,% 2.92 ve% 2.07 idi (n = 6).
| Sayı | A (Yayla arpa şarabı ilavesi, zamanlar) | B (Islanma süresi, h) | C (Dilimleme kalınlığı, cm) | MDA'ların içeriği (mg/g) | DDA'ların içeriği (mg/g) | Kapsamlı puanlama/puan |
| 1 | 4 | 36 | 0.5 | 0.1032 | 0.6882 | 28.2 |
| 2 | 5 | 48 | 1.5 | 0.1688 | 0.6588 | 56.49 |
| 3 | 6 | 24 | 1 | 0.1236 | 0.6535 | 33.02 |
| 4 | 5 | 24 | 1.5 | 0.2201 | 0.692 | 87.23 |
| 5 | 5 | 36 | 1 | 0.2094 | 0.6199 | 70.71 |
| 6 | 5 | 24 | 0.5 | 0.1809 | 0.5689 | 48.56 |
| 7 | 4 | 24 | 1 | 0.2016 | 0.7744 | 90.74 |
| 8 | 5 | 36 | 1 | 0.2169 | 0.6889 | 85.15 |
| 9 | 5 | 36 | 1 | 0.2103 | 0.6802 | 80.5 |
| 10 | 6 | 36 | 0.5 | 0.1036 | 0.5072 | 0.36 |
| 11 | 6 | 36 | 1.5 | 0.1089 | 0.5062 | 2.86 |
| 12 | 4 | 48 | 1 | 0.1789 | 0.6789 | 64.6 |
| 13 | 6 | 48 | 1 | 0.1036 | 0.5536 | 7.55 |
| 14 | 5 | 36 | 1 | 0.2062 | 0.6084 | 67.33 |
| 15 | 4 | 36 | 1.5 | 0.1832 | 0.6954 | 69.31 |
| 16 | 5 | 48 | 0.5 | 0.1759 | 0.5569 | 44.21 |
| 17 | 5 | 36 | 1 | 0.2161 | 0.6894 | 84.82 |
Tablo 11: Tepki yüzeyi tasarım testinin tasarımı ve sonuçları.
| Kaynak | Karelerin Toplamı | Df | Ortalama Kare | F -Değer | P-Değeri |
| Model | 14403.27 | 9 | 1600.36 | 30.8 | <0.0001 |
| A | 5463.26 | 1 | 5463.26 | 105.15 | <0.0001 |
| B | 939.61 | 1 | 939.61 | 18.08 | 0.0038 |
| C | 1117.7 | 1 | 1117.7 | 21.51 | 0.0024 |
| AB | 0.11 | 1 | 0.11 | 0.00216 | 0.9642 |
| AC | 372.68 | 1 | 372.68 | 7.17 | 0.0316 |
| MÖ | 174.11 | 1 | 174.11 | 3.35 | 0.1099 |
| A2 | 4133.52 | 1 | 4133.52 | 79.55 | <0.0001 |
| B2 | 28.63 | 1 | 28.63 | 0.55 | 0.482 |
| C2 | 1890.1 | 1 | 1890.1 | 36.38 | 0.0005 |
| Artık | 363.71 | 7 | 51.96 | ||
| Uyum eksikliği | 93.28 | 3 | 31.09 | 0.46 | 0.7253 |
| Saf Hata | 270.43 | 4 | 67.61 | ||
| Cor Toplam | 14766.99 | 16 |
Tablo 12: Regresyon modeli için ANOVA.
Ek Dosya 1: Box-Behnken tasarım yazılımının ayrıntılı bir kılavuzu. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Ek Tablo S1: HPLC tarafından dilimleme kalınlığı testinin örnek tepe alanı. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Ek Tablo S2: Dilimleme kalınlığı testinde MDA'ların (benzoylakonin) ve DDA'ların (akonitin, 3-deoksiakonitin ve 3-asetilakonitin) içeriği. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Ek Tablo S3: Dilimleme kalınlığı testinin kapsamlı puanlaması. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Toksik etkileri olan yaygın olarak kullanılan bir Tibet ilacı olarak, işlemenin toksisiteyi zayıflatıcı etkisi, TBC'nin klinik uygulaması için son derece önemlidir25. Bu çalışmada yayla arpa şarabı ile işlenen TBC'nin işleme teknolojisi optimize edilmiştir. Ana aktif bileşenleri gözden geçirerek ve TBC'nin farmakolojik etkilerini ilişkilendirerek, TBC alkaloidlerinin anti-enflamatuar ve analjezik etkilere sahip olduğunu ve romatoid artrit tedavisinde kullanılabileceğini bulduk. Bu çalışmada pozitif gösterge olarak orta derecede toksik MDA kullanılmıştır. DDA'ların toplam içeriği negatif gösterge olarak kullanılmıştır. Entropi yöntemi, indeks ağırlıklarının hesaplanmasında ve işleme teknolojisinin optimize edilmesinde kullanılmıştır26.
Deney sırasında, iki noktaya özellikle dikkat edilmelidir. İlk olarak, sonraki sonuçların doğruluğunu artırmak için tek bir faktörün her koşulu için üç paralel deney seti gereklidir. İkincisi, kapsamlı puanların hesaplanmasında, her göstergenin standartlaştırılmış değerleri, ham veriler yerine ağırlıklandırma faktörü ile çarpılır. Bu prosedür, hesaplama sonuçlarının doğruluğunu sağlar. Ek olarak, ANOVA'daki R2 değeri bire mümkün olduğunca yakın olmalıdır; aksi takdirde, faktörlerin seviyeleri son derece yakındır ve sonuçlar üzerinde çok az etkisi vardır; Seviyeler arasındaki fark orta derecede geniş olmalıdır.
Yanıt yüzeyi yöntemiyle birlikte çok indeksli kapsamlı puanlamanın kullanılması, TBC'nin işleme sürecinin kesin tahminini sağlasa da, sınırlamaları vardır. İlk olarak, laboratuvarlar tıbbi malzemelerde belirtilen bileşenleri ölçmek için HPLC kullandığında, küçük ölçekli deneyler nedeniyle insan hatası oluşabilir. Pilot değerlendirme büyük boyutlu bir bitki işleme fabrikasında yapılırsa daha ikna edici sonuçlar elde edilebilir. İkincisi, Box-Behnken tasarım yöntemi tüm sürecin optimizasyonu için uygun değildir. Deneysel verileri yanıt yüzeyi yazılımına aktardıktan sonra, model teriminin anlamlı olması (p < 0.05) ve ANOVA verilerinde uyum eksikliğinin önemsiz olması (p > 0.05) gerekir. Sonuç tersine çevrilirse, işlem bu yöntemle optimizasyon için uygun değildir.
Sonuç olarak, yaygın olarak kullanılan tek faktörlü test, tekdüze tasarım, ortogonal tasarım ve yıldız noktası tasarımı ile karşılaştırıldığında, Box-Behnken tepki yüzeyi yaklaşımı,27'ye uyan çok değişkenli doğrusal ve ikinci dereceden terim modelini kullanan deneysel bir optimizasyon tasarım yöntemidir. Behnken yanıt yüzeyi yöntemi ile öngörülen model, sürekliliğe ve yüksek deneysel doğruluğa sahiptir ve optimal noktaları28,29 olarak tahmin eder. Bu deneyde, TBC'nin tercih edilen süreci, tek faktörlü teste dayanan kapsamlı puanlama ile belirlendi ve son doğrulama testi, seçilen modelin makul olduğunu ve yayla arpa şarabı ile işlenen TBC'nin işleme teknolojisi için referanslar sağlayabileceğini göstererek, öngörülen değerden çok fazla sapmadı. Optimize edilmiş işleme teknolojisi, diğer toksik etnik ilaçların işlenmesinin toksisiteyi zayıflatıcı etkisinin incelenmesi için bilgi ve rehberlik sağlayabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların açıklayacak çıkar çatışmaları yoktur.
Acknowledgments
Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (No. 82130113), Çin Doktora Sonrası Bilim Vakfı (No. 2021MD703800), Sichuan Eyaleti Bilim ve Teknoloji Bölümü Gençleri Bilim Vakfı (No. 2022NSFSC1449) ve Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi "Xinglin Scholars" Araştırma Tanıtım Programı (No. BSH2021009).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Aconitine | Chengdu Push Biotechnology Co.,Ltd | PS000905 | |
| 3-Acetylaconitine | Chengdu Push Biotechnology Co.,Ltd | PS010552 | |
| 3-Deoxyaconitine | Chengdu Push Biotechnology Co.,Ltd | PS011258 | |
| Benzoylaconine | Chengdu Push Biotechnology Co.,Ltd | PS010300 | |
| Circulating water vacuum pump | Gongyi City Yuhua Instrument Co., Ltd | SHZ-DIII | |
| Design-Expert | State-East Corporation | 8.0.6 | |
| Electric constant temperature drying oven | Shanghai Yuejin Medical Equipment Co., Ltd | 101-3-BS | |
| Electronic analytical balance | Shanghai Liangping Instruments Co., Ltd. | FA1004 | |
| High performance liquid chromatography | Shimadzu Enterprise Management (China) Co., Ltd | shimadzu 2030 | |
| Highland barley rice | Kangding City, Ganzi Tibetan Autonomous Prefecture, Sichuan Province | 20221015 | |
| Millipore filter | Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd | φ13 0.22 Nylon66 | |
| Rotary evaporator | Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory | RE-2000A | |
| Starter of liquor-making | Angel Yeast CO., Ltd | BJ22-104 | |
| Ultra pure water systemic | Merck Millipore Ltd. | Milli-Q | |
| Ultrasonic cleansing machine | Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd | SB-8200 DTS |
References
- Zhang, J., et al. Study of quality standards for Aconitum pendulum Busch. Chinese Traditional Patent Medicine. 40 (9), 2100-2103 (2018).
- Liu, X. F., et al. Study on toxicity reduction and effect preservation of the compatibility of Tibetan medicine Aconitum pendulum Busch and Terminalia chebula Retz. Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica. 13 (3), 69-72 (2022).
- Luo, D. S. Chinese Tibetan herbs. 63, Ethnic publishing House. Beijing. (2007).
- Li, C. Y., et al. Aconitum pendulum Busch and A. flavum Hand-Mazz: A narrative review on traditional uses, phytochemistry, bioactivities and processing methods. Journal of Ethnopharmacology. 292, 115216 (2022).
- Yu, L. Q., et al. Traditional Tibetan medicine: therapeutic potential in rheumatoid arthritis. Frontiers in Pharmacology. 13, 938915 (2022).
- Zhang, Y., Fu, X. Y. UPLC Simultaneous determination of six esteric alkaloids components in Aconitum pendulum Busch. Asia-pacific Traditional Medicine. 16 (5), 62-65 (2020).
- Wang, Y. J., et al. Determination of alkaloid content in different medicinal parts of the folk medicine. Aconitum pendulum Busch. Chinese Traditional Patent Medicine. 32 (8), 1390-1393 (2010).
- Shao, C. L., Fu, J. L., Fu, S. X., Ma, H. W., Sun, X. D. Toxicity research and processing methods of Aconitum pendulum Busch. Asia-pacific Traditional Medicine. 10 (2), 32-34 (2014).
- Chan, T. Y. K.
- Li, S. L., et al. An insight into current advances on pharmacology, pharmacokinetics, toxicity and detoxification of aconitine. Biomedicine & Pharmacotherapy. 151, 113115 (2022).
- Zhao, M. Y. Study on identification and processing attenuation of Tibetan drug Bangna. Southwest Jiaotong University. , (2018).
- Tibet Autonomous Region Food and Drug Administration. Tibetan herbal medicine concoction specification. , Tibetan People's Publishing House. Lhasa. 135 (2008).
- Abd-El-Aziz, N. M., Hifnawy, M. S., El-Ashmawy, A. A., Lotfy, R. A., Younis, I. Y. Application of Box-Behnken design for optimization of phenolics extraction from Leontodon hispidulus in relation to its antioxidant, anti-inflammatory and cytotoxic activities. Scientific Reports. 12 (1), 8829 (2022).
- Quan, L., et al. Optimization of processing technology of stir-frying with vinegar of Curcuma Longa Radix by orthogonal design and Box-Behnken design-response surface based on entropy method. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 49 (8), 1823-1828 (2018).
- Jia, F. C., et al. Research on the brewing technology of Tibetan traditional barley liquor based on response surface method. Food and Fermentation Industries. 45 (22), 171-178 (2019).
- Zhao, X. H., et al. Determination of osthol in different traditional Chinese medicines by HPLC. Chinese Journal of Pharmaceutics. 19 (5), 154-158 (2021).
- Feng, Z. G., et al. Processing methods and the underlying detoxification mechanisms for toxic medicinal materials used by ethnic minorities in China: A review. Journal of Ethnopharmacology. 305, 116126 (2023).
- Wang, D. M., Lu, Z. J., Wang, Y. H., Zhang, C. S. Applying grading methods of synthesizing multiple guidelines to optimizing alcohol-steam processing technology from Ploygonatum odordatum. Journal of Zhejiang A & F University. 30 (1), 100-106 (2013).
- He, N. L., Bao, M. L., Ba, G. N. Study on the best processing technology of Terminalia Decoction soaking iron. Journal of Medicine & Pharmacy of Chinese Minorities. 20 (9), 36-38 (2014).
- Liu, C., et al. Optimization of processing technology for Saposhnikoviae Radix by Box-Behnken design-response surface methodology. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 20 (5), 18-21 (2014).
- Ferreira, S. L. C., et al. Box-Behnken design: an alternative for the optimization of analytical methods. Analytica Chimica Acta. 597 (2), 179-186 (2007).
- Dong, R., Lu, Y., Wang, P. The process optimization of vinegar roasting of Bupleurum chinense by entropy weight method combined with Box-Behnken response surface method and its protective effect on mice liver injury. Science and Technology of Food Industry. 42 (23), 209-217 (2021).
- Li, W. J., et al. Analysis on the times of Polygonati Rhizoma steamed by multiple times based on entropy weight and gray relative analysis method. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy. 36 (11), 6764-6769 (2021).
- Huang, B. J., Liu, X. T., Mao, Y. M., Qi, B., Liu, L. Response surface methodology combined with analytic hierarchy process to optimize the processing technology of Custutae semen with wine. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 33 (8), 1890-1894 (2022).
- Wang, J., Meng, X. H., Chai, T., Yang, J. L., Shi, Y. P. Diterpenoid alkaloids and one lignan from the roots of Aconitum pendulum Busch. Natural Products and Bioprospecting. 9 (6), 419-423 (2019).
- Xie, H. H., et al. Metabolomics study of aconitine and benzoylaconine induced reproductive toxicity in Be Wo cell. Chinese Journal of Analytical Chemistry. 43 (12), 1808-1813 (2015).
- Han, Y. F., et al. Optimization of extraction process for Yangyin Runmu granules by Box-Behnken design based on entropy weight method-analytic hierarchy process method. Chinese Journal of Modern Applied Pharmacy. 39 (7), 896-903 (2022).
- Chen, F. G., et al. Optimization of the baked drying technology of Clinamomi Ramulus based on CRITIC combined with Box-Behnken response surface method. Journal of Chinese Medicinal Materials. 2022 (8), 1838-1842 (2022).
- Pan, Y. L. Optimization of stir-baking process of Coix lacryma-Jobi Var.Mayuen Kernel by Box-Behnken response surface methodology. Shandong Chemical Industry. 51 (14), 73-75 (2022).
