JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Krebsforschung
0 Aufrufe • 4:01 Min. • April 30th, 2023
Züchten Sie die gewünschte Zelllinie als adhärente 2D-Monoschicht. Entfernen Sie das Nährmedium und waschen Sie es mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung oder PBS. Dann wird Trypsin hinzugefügt und inkubiert, während sich die Zellen von der Kolbenoberfläche lösen und rund werden. Fügen Sie frische Medien hinzu, um das Trypsin zu neutralisieren und die Zellen zu suspendieren. Füllen Sie die Mischung in ein konisches Rohr und verwenden Sie eine Zentrifuge, um die Zellen zu pelletieren.
Ersetzen Sie den Überstand durch frisches Medium und resuspendieren Sie das Pellet der Zelle. Verwenden Sie ein Hämozytometer, um die Zellzahl zu zählen und eine Arbeitskonzentration zu berechnen. Übertragen Sie dann die richtige Menge der Zellmischung in eine Well-Platte mit rundem Boden und extrem geringer Adhäsion und inkubieren Sie. Die Zellen setzen sich am Boden ab und aggregieren. Sie werden schließlich aneinander aneinander anheften und eine kompakte 3D-Zellanordnung, das Sphäroide, bilden.
Im Beispielprotokoll sehen wir, wie man 3D-Sphäroide aus einer Darmkrebszelllinie generiert und wie Live-Bildgebung angewendet wird, um ihre Entstehung zu verfolgen. Beginnen Sie damit, die interessierende Dar
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos