Egg Laying Assay: Eine Methode zur Quantifizierung des Eiablageverhaltens von C. elegans

- Experimente zur Quantifizierung der Eiablage haben die neurologischen Komponenten und Umwelteinflüsse aufgedeckt, die dieses Verhalten beeinflussen. Veränderungen im Eiablageverhalten können auf toxische Wirkungen auf das neuromuskuläre oder reproduktive System hinweisen.

Um die Toxizität zu testen, ziehen Sie entwicklungssynchronisierte Eier auf Nematoden-Wachstumsmedienplatten mit und ohne die interessierende Verbindung auf. Bei diesen Experimenten wird hitzeabgetötetes bakterielles Wurmfutter verwendet, um zu verhindern, dass die Bakterien die Verbindung verstoffwechseln. Lassen Sie diese Generation wachsen, bis sie junge Erwachsene werden.

Setzen Sie dann die Würmer unter geeigneten Kontroll- oder Versuchsbedingungen auf neue Platten und lassen Sie sie 24 Stunden lang Eier legen. Jeden Tag die erwachsenen Tiere auf einen neuen Teller legen und die Eier auf dem vorherigen Teller zählen. Fahren Sie fort, bis die erwachsenen Tiere aufhören zu legen, etwa fünf Tage für Wildtyp-Würmer. Berechnen Sie die Anzahl der Eier, die pro erwachsenem Wurm pro Tag gelegt werden, und addieren Sie die Gesamtzahl am Ende des Experiments.

Im Beispielprotokoll werden wir den C. elegans-Eiablage-Assay verwenden, um Etoposid - ein Chemotherapeutikum - auf Reproduktionstoxizität zu testen.

- Inkubieren Sie die alterssynchronisierten Eier auf der NGM-Platte, die DMSO oder Etoposid enthält, bei 20 Grad Celsius für 64 Stunden bis zum Stadium des jungen Erwachsenen. Übertragen Sie fünf adulte Würmer auf neue NGM-Platten ohne Chemikalien oder neue NGM-Platten, die die gleiche chemische Vorbehandlung enthalten, und inkubieren Sie sie 24 Stunden lang.

Übertragen Sie die erwachsenen Tiere, wie gerade gezeigt, auf neue NGM-Platten und zählen Sie die Anzahl der Eizellen jeden Tag. Zählen Sie außerdem die Würmer, die abgekrochen sind, gestorben sind oder innerlich geschlüpft sind. Führen Sie Berechnungen gemäß dem Textprotokoll durch.