Encyclopedia of Experiments: Biology
Ein Abonnement für JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt ansehen zu können. Melden Sie sich an oder starten Sie Ihre kostenlose Testversion.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- ابدأ بإضافة E3 متوسطة إلى منخفضة نقطة انصهار agarose والتدفئة حتى يذوب agarose تماما. كول الآغروز إلى 37 درجة مئوية وإضافة محلول tricaine.
باستخدام ماصة نقل، وضع جنين واحد مع الحد الأدنى من المتوسطة. عقد ماصة في وضع مستقيم وترتد الجنين لوضعه في غيض من المصصة. الآن وضع الجنين في محلول الآغاروز دون إضافة أي وسيلة الزائدة، والتي من شأنها أن تمييع agarose ومنع التبلور. مزيج بلطف الجنين داخل الآغاروز ونقل الحل إلى بئر لوحة التصوير باستخدام ماصة.
ضع اللوحة تحت المجهر واستخدم طرف ماصة لوضع الجنين في الاتجاه المطلوب.
للحصول على صور للأجنة المنصهرة، قم بإعداد agarose نقطة انصهار منخفضة بنسبة 0.8٪. في حين لا تزال ساخنة، aliquot ملليلتر واحد من الآغروز في أنابيب ميكروفوج 1.5 ملليلتر المنصوص عليها في كتلة التدفئة 37 درجة مئوية.
ثم باستخدام ماصة نقل بلاستيكية ذات رؤوس عريضة، وضع الأجنة في أقل قدر ممكن من السائل.
ثم، مع ماصة، ونقل الآجروز والأجنة إلى بئر من أسفل الزجاج لوحة ستة آبار. تحت المجهر ستيريو، استخدم طرف تحميل هلام ثابتة إلى نهاية إبرة إغاظة لوضع الأجنة على مقربة من الزجاج الغطاء وفي الاتجاه المطلوب للتصوير. بعد أن تم تعيين agarose والمتوسطة مع tricaine تمت إضافتها إلى الآبار، واستخدام مقلوب واسعة المجال epifluorescence الليزر المسح confocal أو الغزل المجهر الكونفوجكال القرص للحصول على الصور.
لحقل رؤية جنين كامل، استخدم ذاتية 4x. استخدم هدفا 20x لتصوير نسيج معين.
