Agar-Einbettung: Eine grundlegende Methode zur Einbettung lebender Zebrafisch-Embryonen für die Langzeitbildgebung

- Beginnen Sie mit der Zugabe von E3 Agarose bei mittlerem bis niedrigem Schmelzpunkt und erhitzen Sie, bis sich die Agarose vollständig aufgelöst hat. Die Agarose auf 37 Grad Celsius abkühlen lassen und Tricainlösung hinzufügen. Als nächstes betäuben Sie die Embryonen, indem Sie Tricain in eine Petrischale mit Embryonen im E3-Medium geben. Schwenken Sie die Petrischale, um die Embryonen in der Mitte zu sammeln.

Entnehmen Sie mit einer Transferpipette einen Embryo mit einer minimalen Menge Medium. Halten Sie die Pipette in einer aufrechten Position und lassen Sie den Embryo wippen, um ihn an der Spitze der Pipette zu positionieren. Legen Sie nun den Embryo in die Agaroselösung, ohne überschüssiges Medium hinzuzufügen, das die Agarose verdünnen und eine Gelierung verhindern würde. Mischen Sie den Embryo vorsichtig mit der Agarose und geben Sie die Lösung mit der Pipette in die Vertiefung einer Speicherfolie.

Legen Sie die Platte unter ein Mikroskop und positionieren Sie den Embryo mit einer Pipettenspitze in der gewünschten Ausrichtung. Sobald die Agarose erstarrt ist, gießen Sie E3-Medium, das Tricain enthält, darüber, um den Agar hydratisiert zu halten und den Embryo abzubilden. I