Lungenvorbereitung der Maus für die Durchflusszytometrie: Erzeugung von Zellsuspension aus Lungengewebe für die durchflusszytometrische Analyse

- Beginnen Sie damit, eine euthanasierte Maus zu nehmen und sie mit Laborklebeband auf einem Sezierbrett zu befestigen. Schneide die Haut mit einer Schere auf. Machen Sie einen vertikalen Schnitt durch das Zwerchfell und schneiden Sie die Rippen, um die Brusthöhle zu erreichen, die Herz und Lunge freilegt. Machen Sie als nächstes einen kleinen Schnitt in der linken Herzkammer des Herzens. Lokalisieren Sie anschließend den rechten Ventrikel und führen Sie eine Spritze mit PBS in das Lumen des Ventrikels ein. Perfundieren Sie PBS durch den rechten Ventrikel und lassen Sie das Blut aus dem vorgefertigten Schnitt am linken Ventrikel fließen, bis die Lunge weiß wird. Das Lungengewebe mit Tumorknötchen herausnehmen und in kleine Stücke zerkleinern.

Inkubieren Sie die Stücke im Lungenverdauungspuffer. Kollagenase im Lungenverdauungspuffer hilft, Zellen zu isolieren, und DNAse hilft, DNA aus den toten Zellen zu eliminieren. Die resultierende Suspension durch ein Zellsieb abseihen, um Klumpen zu entfernen und die Zellsuspension gleichmäßig zu machen. Zentrifugieren Sie das Pellet und resuspendieren Sie es im Ammoniumchlorid-Kalium-Puffer, um die verbleibenden Erythrozyten zu lysieren. Zentr