Name: Experimentelle Metastasierung und CTL adoptiven Transfer Immuntherapie Maus-Modell (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-26T15:03:00.000+00:00
Duration: 8 min 6 s
Description: Erfahren Sie die adoptive CTL-Transfer-Immuntherapie bei Lungenmetastasen in Mäusen. Diese Methode ermöglicht die quantitative Analyse von Tumor-T-Zell-Interaktionen in vivo.

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Unterstützt durch Mittel der National Institutes of Health (CA133085 zu KL) und der American Cancer Society (RSG-09-209 bis 01-TBG zu KL).

1. Experimentelle Metastasen Maus-Modell <ol><li> Am Tag vor der Tumorzelle Injektionen, Saatgut ein T75 Kolben mit bis zu 1 x 10 7 CMS4-Met-Zellen in 10 ml RPMI-Medium mit 10% Serum zu den schnell wachsenden Tumorzellen zu erhalten. Inkubieren über Nacht bei 37 ° C. </li><li> Am Tag der Injektion, entfernen Sie das Medium und spülen Sie die Zellen einmal mit PBS, dann ernten die Tumorzellen mit 0,05% Trypsin-EDTA bei 37 ° C für 5 Minuten. Stoppen der Reaktion mit 10 ml RPMI-Medium mit 10% Serum. Transfer-Zellen zu einem konischen Rohr. </li><li> Spin down die Zellen bei 1300 rpm in einem Sorvall Legend RT Zentrifuge für 3 Minuten bei Raumtemperatur. Entfernen Sie den Überstand. Resuspendieren der Zellen in 10 mL frisch 1X HBSS zu waschen, dann drehen sich wieder und resuspendieren in der gleichen Weise. </li><li> Zählen Sie die Tumorzellen auf einer Zählkammer. Verdünnen Sie die Zellen in HBSS, so dass die Zellen bei jeder Injektion erforderlich in einem Gesamtvolumen von 100 ul resuspendiert werden. </li><li> Warm die 6-8 Wochen alten BALB / c-Mäusen in einem Becherglas in warmes Wasser getaucht, um die Schwanzvene erweitern. Legen Sie die Maus auf eine Schwanzvene restrainer auf der Bank. Verwenden Sie einen Mikrospritze zu 100 ul von Tumorzellen in die laterale Schwanzvene injiziert. Sie aseptisch, um Infektionen zu vermeiden. Nach der Injektion mit leichtem Druck auf die Injektionsstelle, bis die Blutung aufgehört hat. </li><li> Bringen Sie die Maus, um den Käfig und lassen den Tumor, um zum gewünschten Zeitpunkt zu wachsen. </li></ol> 2. Zytotoxische T-Lymphozyten (CTL) adoptiven Transfer Immuntherapie <ol><li> Am Tag des Übergangs, Pipette auf und ab zu reinigende zytotoxischen T-Lymphozyten oder CTLs, hergestellt, wie im Text beschrieben resuspendieren. Übertragen Sie alle der Zellen von einer Platte auf eine 15 ml konischen Rohr, ließ nicht das Volumen überschreiten mehr als 2 / 3 des Rohres. </li><li> Legen Sie eine sterile Pasteur Pipette in die konischen Rohr und lag Lymphozyten Trennmedium oder LSM unter den Zellen, bis das Gesamtvolumen nähert 14 mL. </li><li> Achten Sie darauf, um die Schichten zu stören. Zentrifugation bei 2000 rpm für 20 Minuten bei Raumtemperatur. Verwenden Sie nicht die Bremse, um den Rotor nach dem Schleudern langsam. </li><li> Übertragen Sie die CTLs zu einem neuen 15 ml konischen Rohr. Add HBSS auf ein Volumen von ca. 10 mL zu waschen. </li><li> Zählen Sie die Zellen. Spin down bei 1300 rpm für 5 Minuten bei Raumtemperatur. Resuspendieren in HBSS auf die gewünschte Zelldichte für Injektionen, halten das Gesamtvolumen pro Injektion bei 100 ul. </li><li> Verwenden Sie den gleichen Schwanz Injektionstechnik wie zuvor in diesem Video die CTLs in tumortragenden Mäusen injiziert gesehen. </li><li> Bringen Sie die Maus, um den Käfig, und lassen Sie die CTLs mit dem Tumor zu interagieren. Mäuse sind in der Regel für die Analyse 14-21 Tage nach der CTL der Behandlung getötet. </li></ol> 3. Visualisierung von Lungenmetastasen <ol><li> Zur Visualisierung Lungenmetastasen, statt eines geopferten Maus auf dem Rücken auf einer Styropor-Platte. Pin den Beinen, um einen ungehinderten Zugang zur Luftröhre zu gewährleisten. Spray der Bauchseite mit 70% Ethanol. </li><li> Ab der Mitte des Bauches, mit einer Schere entlang der Mittellinie geschnitten, durch den Brustkorb, und bis zu den Speicheldrüsen. Expose der Luftröhre. Verwenden einer Pinzette, um Gewebe um die Luftröhre zu entfernen. </li><li> Thema einem 200 ul Pipettenspitze unter der Luftröhre. Halten Sie die Spitze mit einer Hand, heben die Luftröhre nach oben und weg vom Körper. </li><li> Drehen Sie die Plattform 180 °. Verwenden Sie eine 50 ml Spritze mit Tusche in die Lunge injiziert über die Luftröhre. Völlig aufblasen der Lunge mit Tinte, bis Sie einen starken Widerstand spüren. </li><li> Mit einer Schere in die Luftröhre geschnitten. Schieben einer Pinzette unter den Lungen und heben sie aus der Maus. Spülen Sie die Lunge kurz in einer 1L Becher Wasser. </li><li> In einem Laborabzug, Übertragung der Lunge zu einer Glasszintillationsröhrchen mit 5 ml Fekete-Lösung. Das Tumorgewebe wird als weiße Knötchen auf der schwarzen Lunge nach wenigen Minuten entstehen. Die Tumoren können nun gezählt und gespeichert werden Fekete-Lösung auf unbestimmte Zeit. </li></ol> 4. Vertreter Metastasen in Lunge Visualisierte <ol><li> Hier zeigen Lungen von Mäusen, die mit Mamma-Karzinom-Zelllinie 4T1 injiziert wurden weiße Flecken zeigt Tumoren. Mäuse, die mit 4T1-Zellen mit einem IRF8 dominant-negativen Mutante K79E transfizierten injiziert wurden, zeigen die verbesserten metastatische Potential von Tumorzellen. </li><li> Diese Bilder zeigen eine histologische Analyse der Wirksamkeit von CTL adoptiven Transfer Immuntherapie. Tumor-tragenden Mäusen mit Kochsalzlösung injiziert zeigten multiple Tumore 6 Tage später, angezeigt durch gelbe Pfeile (A). Mäuse mit Tumor-spezifischen T-Zellen injiziert, auf der anderen Seite, zeigten eine Reduktion von Tumoren (B). </li><li> In das gleiche Experiment, gibt Tusche Behandlung einen einfacheren Weg, um die Wirksamkeit von CTL adoptiven Transfer zu messen. Hier die weiße Tumorknötchen auf tumortragenden Lunge deutlich von Lunge, die erfolgreich CTL adoptiven Transfer erfahren haben, und das Zählen der Knoten ermöglicht einen Gradder Quantifizierung nicht möglich mit der Histologie. </li></ol> 5. Repräsentative Ergebnisse <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig1.jpg" alt="Abbildung 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1. Experimental System für den experimentellen Metastasierung und CTL adaptive Transfer Immuntherapie Mausmodell. Rote Punkte zeigen, Tumorzellen und grüne Punkte zeigen CTLs. <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig2.jpg" alt="Abbildung 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2. Unterbrechung der IRF8 Funktion verbessert die metastatische Potential von Tumorzellen. Maus Mammakarzinom-Zelllinie 4T1 wurde stabil mit dem Vektor (4T1.Vector) oder Vektor-Ausdruck einer IRF8 dominant-negativen Mutante K79E (4T1.IRF8K79E) (15, 16) transfiziert. Tumorzellen wurden iv injiziert Maus seitliche Schwanzvene. Tumor-tragende Lungen wurden mit Tusche aufgeblasen, um Tumorknoten zu visualisieren. Tumorknoten sind leicht als weiße Flecken auf der schwarzen Lungengewebes Hintergrund zu sehen. <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig3.jpg" alt="Abbildung 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 3"> Abbildung 3. Histologische Analyse der Wirksamkeit von CTL adoptiven Transfer Immuntherapie. Maus-Sarkom-Zelllinie CMS4-Met wurde iv in Maus-laterale Schwanzvene injiziert. Drei Tage später wurden Kochsalzlösung (A) oder Tumor-spezifischer T-Zellen (B) in den Tumor-tragenden Mäusen injiziert. Lungen wurden sechs Tage nach der CTL der Behandlung mit konventionellen H &amp; E histologischen Färbung analysiert. Tumorknoten sind durch Pfeile angedeutet. <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig4.jpg" alt="Abbildung 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 4"> Abbildung 4. Visualisierung von Tumorknoten von Tusche Inflation. Maus-Sarkom-Zelllinie CMS4-Met wurde iv in Maus-laterale Schwanzvene injiziert. Drei Tage später wurden Kochsalzlösung (Control) oder Tumor-spezifischer T-Zellen (+ CTL) in den Tumor-tragenden Mäusen injiziert. Lungen wurden 14 Tage nach der CTL-Behandlung untersucht. Die weißen Flecken, die Tumorknoten sind, ermöglichen eine einfache Quantifizierung der Wirksamkeit von CTL Behandlung.

<ol><li>Ryan, M. H., Bristol, J. A., McDuffie, E., Abrams, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+extensive+pulmonary+metastases+in+mice+by+adoptive+transfer+of+antigen-specific+CD8%28%2B%29+CTL+reactive+against+tumor+cells+expressing+a+naturally+occurring+rejection+epitope%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regression of extensive pulmonary metastases in mice by adoptive transfer of antigen-specific CD8(+) CTL reactive against tumor cells expressing a naturally occurring rejection epitope.</a> J Immunol. 167 (8), 4286-4292 (2001).</li>
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<li>Yang, D., Thangaraju, M., Greeneltch, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repression+of+IFN+regulatory+factor+8+by+DNA+methylation+is+a+molecular+determinant+of+apoptotic+resistance+and+metastatic+phenotype+in+metastatic+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+research%22%5BJournal%5D)">Repression of IFN regulatory factor 8 by DNA methylation is a molecular determinant of apoptotic resistance and metastatic phenotype in metastatic tumor cells.</a> Cancer research. 67 (7), 3301-3309 (2007).</li>
<li>Wexler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+identification+of+experimental+pulmonary+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">Accurate identification of experimental pulmonary metastases.</a> Journal of the National Cancer Institute. 36 (4), 641-645 (1966).</li>
</ol>

Die Mäuse wurden von der National Cancer Institute (Friderick, MD) erworben und befindet sich in der Medical College of Georgia Tierhaltung. Experimente und Pflege / Wohlfahrt wurden in Übereinstimmung mit behördlichen Vorschriften und genehmigten Protokoll vom Medical College of Georgia IACUC Ausschuss.

Solutions: Tusche-Lösung (17): <ol><li> Gießen Sie 150 ml destilliertem Wasser in einen 250 ml-Flasche. </li><li> 4 Tropfen Ammoniak zu dem destillierten Wasser. </li><li> 30 ml Tusche Lager (dh Sanford Black Magic Waterproof Drawing Ink 4465 Artikel 44011), um die Ammoniak-Wasser-Gemisch. </li><li> Top mit destilliertem Wasser auf ein Volumen von 200 ml. Lösung ist bereit für die Injektion. </li></ol> Fekete-Lösung (17): Fekete-Lösung ist zu bleichen Tusche aufgeblasenen tumortragenden Lunge verwendet werden, um weiße Tumorknoten aus dem schwarzen Hintergrund der normalen Gewebe unterscheiden kann. <ol><li> Add 350ml 95% EtOH auf 1L Glasflasche. </li><li> Add 150 ml destilliertem Wasser </li><li> Fügen Sie 50ml Formaldehyd </li><li> Fügen Sie 25ml Eisessig Essigsäure </li></ol>

experimentelle metastasierung und ctl adoptiven transfer immuntherapie maus-modell

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Experimentelle Metastasen Mausmodell ist eine einfache und dennoch physiologisch relevanten Metastasen-Modell. Die Tumorzellen werden intravenös (iv) in Maus-tail Venen gespritzt und besiedeln in der Lunge und damit, ähnlich wie die letzten Schritte der Metastasierung von Tumorzellen spontan: Überleben in der Zirkulation, Extravasation und Kolonialisierung in den distalen Organen. Aus therapeutischer Sicht ist die experimentelle Metastasierung Modell die einfachste und ideale Modell, da das Ziel der Therapien ist oft der Endpunkt der Metastasierung: etablierte metastasierten Tumor in der distalen Orgel. In diesem Modell werden Tumorzellen iv injiziert Maus Schwanzvenen und erlaubt zu kolonisieren und in der Lunge wachsen. Tumor-spezifische CTLs werden dann iv in den Metastasen tragenden Maus injiziert. Die Anzahl und Größe der Lungenmetastasen kann durch die Anzahl der Tumorzellen injiziert werden und die Zeit des Tumorwachstums gesteuert werden. Deshalb verschiedenen Stadien der Metastasierung, von minimal Metastasen zu ausgedehnter Metastasierung, werden modelliert. Lungenmetastasen werden durch die Inflation mit Tinte analysiert, so dass einfacher visueller Beobachtung und Quantifizierung.

Eine experimentelle Lungenmetastasen und CTL Immuntherapie Mausmodell für die Analyse von Tumorzellen-T-Zell-Interaktion<em&gt; In vivo</em&gt;.

Experimentelle Metastasierung und CTL adoptiven Transfer Immuntherapie Maus-Modell

Das experimentelle Metastasen-Mausmodell ist ein einfaches und dennoch physiologisch relevantes Metastasenmodell. Die Tumorzellen werden intravenös (i.v.) in ... injiziert.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, die Wirksamkeit einer adoptiven Übertragung von tumorspezifischen T-Zellen als Immuntherapie in vivo zu untersuchen. Zunächst werden Tumorzellen mittels Injektion in die seitliche Schwanzvene in Mäuse übertragen, um Lungenmetastasen zu etablieren. Der zweite Schritt des Verfahrens besteht darin, die tumortragenden Mäuse mit tumorspezifischen zytotoxischen T-Lymphozyten (CTLs) zu behandeln.Der letzte Schritt besteht darin, Indiantusche zu verwenden, um Tumorknoten sichtbar zu machen und zu quantifizieren. Letztendlich können Ergebnisse erzielt werden, die die CIE verschiedener Behandlungen durch Messung der Tumorgröße und Zählung der Anzahl der Tumorknoten zeigen. Hallo, mein Name ist Mary Zimmerman und ich bin Mitglied des Labors von Dr. Kevin Lu am Medical College of Georgia.Hallo, mein Name ist Shelene Hu. Ich bin Studentin im zweiten Jahr und arbeite außerdem im Labor von Dr. Lou. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber herkömmlichen Methoden wie Überlebenskurven besteht darin, dass dieses Verfahren sowohl qualitativ als auch quantitativ ist. Die Anwendungsmöglichkeiten der Technik könnten sich auf die Krebstherapie erstrecken, da sie der adoptiven T-Zell-Immuntherapie bei menschlichen Krebspatienten nachempfunden ist.Beginnen wir also am Tag vor den Tumorzellinjektionen mit der Aussaat einer T-75-Flasche mit bis zu 1 × 10⁷ CMS-4-Met-Zellen in 10 Milliliter RPMI-Medium, das 10 % Serum enthält. Um schnell wachsende Tumorzellen zu erhalten, über Nacht bei 37 °C inkubieren am Tag der Injektion.Entfernen Sie das Medium und waschen Sie die Zellen einmal mit PBS, anschließend lösen Sie die Tumorzellen mit 0,05 % Trypsin-EDTA bei 37 Grad Celsius für fünf Minuten ab. Stoppen Sie die Reaktion mit 10 Milliliter RPMI-Medium, das 10 % Serum enthält. Überführen Sie die Zellen in ein kegelförmiges Reagenzglas.Zentrifugieren Sie die Zellen bei 1300 U/min in einer Val-Legend-RT-Zentrifuge für drei Minuten. Entfernen Sie bei Raumtemperatur den Überstand und resuspendieren Sie die Zellen in 10 Milliliter frischem 1× HBSS zur Wäsche. Anschließend erneut zentrifugieren und auf dieselbe Weise resuspendieren.Zählen Sie die Tumorzellen auf einem H&auml;mocytometer. Verd&uuml;nnen Sie die Zellen in HBSS, sodass die f&uuml;r jede Injektion ben&ouml;tigten Zellen resuspendiert werden. Erw&auml;rmen Sie die sechs bis acht Wochen alten B SEA-M&auml;use in einem Becher, der in warmes Wasser eingetaucht ist, in einem Gesamtvolumen von 100 Mikrolitern.Um die Schwanzvene zu weiten, platzieren Sie die Maus in einer Schwanzvenen-Haltevorrichtung auf dem Pult. Injizieren Sie mit einer Mikrospritze 100 µL Tumorzellen in die seitliche Schwanzvene. Wenden Sie eine septische Technik an, um nach der Injektion eine Infektion zu vermeiden.Üben Sie leichten Druck auf die Injektionsstelle aus, bis die Blutung gestoppt ist. Bringen Sie die Maus zurück in den Käfig und lassen Sie den Tumor bis zum gewünschten Stadium wachsen. Am Tag der Übertragung pipettieren Sie auf und ab, um die aufgereinigten zytotoxischen T-Lymphozyten oder CTLs, die vorbereitet wurden, erneut in Suspension zu bringen.Wie im Text beschrieben, überführen Sie alle Zellen von einer Platte in ein 15-Milliliter-Konischglas, wobei das Volumen nicht mehr als zwei Drittel des Glases überschreiten darf. Führen Sie eine sterile Pasteurpipette in das Konischglas ein und schichten Sie das Lymphozytenseparationsmedium oder LSM unter die Zellen, bis das Gesamtvolumen 14 Milliliter nahekommt.Achten Sie darauf, die Schichten nicht zu stören. Zentrifugieren Sie bei 2000 U/min für 20 Minuten bei Raumtemperatur. Verwenden Sie nicht die Bremse, um den Rotor nach dem Zentrifugieren abzubremsen; überführen Sie die CTLs in ein neues kegelförmiges 15-Milliliter-Röhrchen.HBSS auf ein Volumen von etwa 10 Milliliter auffüllen. Zum Waschen. Die Zellen bei 1300 U/min fünf Minuten lang zentrifugieren und bei Raumtemperatur in HBSS auf die erforderliche Zelldichte für Injektionen resuspendieren.Halten Sie das Gesamtvolumen pro Injektion bei 100 Mikrolitern. Verwenden Sie dieselbe Schwanzveneninjektionstechnik, wie sie zuvor in diesem Video gezeigt wurde. Um die CTLs in tumortragende Mäuse zu injizieren, bringen Sie die Maus zurück in den Käfig und lassen Sie die CTLs mit dem Tumor interagieren.Mäuse werden zur Analyse gewöhnlich 14 bis 21 Tage nach der CTL-Behandlung getötet. Um Lungenmetastasen sichtbar zu machen, legen Sie eine getötete Maus auf den Rücken auf eine Styroporplatte. Befestigen Sie die Beine mit Nadeln, um ungehinderten Zugang zur Luftröhre zu gewährleisten.Besprühen Sie die Bauchseite mit 70 % Ethanol, beginnend in der Bauchmitte. Schneiden Sie mit einer Schere entlang der Mittellinie durch den Brustkorb und weiter in Richtung der Speicheldrüsen. Legen Sie die Luftröhre frei.Verwenden Sie eine Pinzette, um das Gewebe um die Luftröhre herum zu entfernen. Führen Sie eine 200-Mikroliter-Pipettenspitze unter die Luftröhre, wobei Sie die Spitze mit einer Hand halten. Heben Sie die Luftröhre vorsichtig an und entfernen Sie sie vom Körper. Drehen Sie die Plattform um 180 Grad. Injizieren Sie mit einer 50-Milliliter-Spritze Tinte über die Trachea in die Lungen. Füllen Sie die Lungen vollständig mit Tinte, bis Sie einen starken Widerstand spüren.Verwenden Sie eine Schere, um die Luftröhre zu durchtrennen. Führen Sie eine Pinzette unter die Lungen ein und heben Sie sie aus der Maus heraus. Spülen Sie die Lungen kurz in einem Ein-Liter-Becher mit Wasser in einer chemischen Abzugshaube ab.Überführen Sie die Lungen in eine Glasapparatur, die fünf Milliliter FTI-Lösung enthält. Das Tumorgewebe wird als weiße Knoten auf den schwarzen Lungen sichtbar. Nach einigen Minuten können die Tumore nun gezählt werden und bleiben unbegrenzt lang in der FTI-Lösung stabil.Lungen von Mäusen, die mit Brustkarzinom transfiziert wurden. Die Zelllinie vier T eins zeigt weiße Flecken, die Tumore anzeigen. Mäuse, die mit einem dominant-negativen IRF-acht-Immunkonstrukt gegen K-79-E transfiziert wurden, zeigen das erhöhte metastatische Potenzial der Tumorzellen.Diese Bilder zeigen eine histologische Analyse der Wirksamkeit einer adoptiven CTL-Immuntherapie. Mäuse mit Tumoren, die mit Kochsalzlösung injiziert wurden, wiesen sechs Tage später mehrere Tumore auf, die durch Pfeile gekennzeichnet sind. Dagegen zeigten Mäuse, die mit tumorspezifischen T-Zellen injiziert wurden, in demselben Experiment eine Verringerung der Tumore.Die Behandlung mit Tusche bietet eine einfachere Möglichkeit, die Wirksamkeit der CTL-Autotransfusion zu messen. Hier unterscheiden sich die weißen Tumorknoten an tumortragenden Lungen deutlich von Lungen, die erfolgreich einer CTL-Autotransfusion unterzogen wurden, und das Zählen der Knoten ermöglicht eine Quantifizierung, die mit der Histologie nicht möglich ist. Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, daran zu denken, die Mäuse aufzuwärmen, um einfachere und genauere Injektionen in die Schwanzvene zu ermöglichen.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie die Wirksamkeit der Behandlung mithilfe dieses einfachen Verfahrens zur Quantifizierung von Tumorgröße und -anzahl beurteilt werden kann. Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg bei Ihren Experimenten.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Die Generierung und Charakterisierung von Tumor-spezifischen T-Zellen mit humanisierten Mäusen wird hier beschrieben. Menschliche Thymus-Gewebe und gentechnisch veränderten humanen hämatopoetischen Stammzellen in immungeschwächten Mäusen transplantiert. Hierdurch ergibt sich der Rekonstitution eines konstruierten menschliche Immunsystem so zur in vivo-Untersuchung von Anti-Tumor-Immunantwort.

Mit der BLT humanisierte Maus als Stem Cell based Gene Therapy Tumormodell

Die Metastasierung von Krebs ist die Hauptursache der durch Krebs verursachten Todesfälle. Wir bieten eine eingehende Beschreibung der unser Überleben Chirurgie Methodik für die Festlegung eines "Patienten-like" orthotopen syngenen Mausmodellsystem zur Untersuchung der Mechanismen der Metastasierung bei soliden Organtumoren.

Ein &quot;Patient-Like&quot; Orthotope Syngene Maus-Modell der Leberzellkarzinom Metastasen

Eine orthotope Brustkrebs primären Tumormodell und die operative Entfernung des Primärtumors Maus Lebensdauer zu verlängern spontane Metastasierung zu erzeugen, werden beschrieben. Das Tumorwachstum und Progression werden überwacht und durch Luciferase Fluoreszenzbildgebung quantifiziert.

Ein orthotopen Mausmodell des Spontan Metastasierung von Brustkrebs

Die Fähigkeit metastasierender Klone, entfernte Stellen zu besiedeln, hängt von ihrer Proliferationskapazität und/oder ihrer Fähigkeit ab, in der Mikroumgebung des Wirts ohne signifikante Proliferation zu überleben. In dieser Arbeit stellen wir ein Tiermodell vor, das eine quantitative Visualisierung beider Arten der Leberbesiedlung durch metastasierende Klone ermöglicht.

Erweiterte Tiermodell für Colorectal Metastase in der Leber: Imaging-Techniken und Eigenschaften des metastasierten Clones

Hier beschreiben wir ein murines Xenograft-Modell, das funktionell einem Ommaya-Reservoir bei Patienten ähnelt. Wir haben die Murine Ommaya entwickelt, um neuartige Therapeutika für die universell tödliche Leptomeningealerkrankung zu untersuchen.

Ein murines Ommaya Xenograft-Modell zur Untersuchung der direkten zielgerichteten Therapie von Leptomeningealerkrankungen

Hier stellen wir ein Tumortransplantationsprotokoll zur Charakterisierung von tumorinhärenten und peripherieabgeleiteten tumorinfiltrierten Lymphozyten in einem Maustumormodell vor. Die spezifische Verfolgung des Zustroms von Empfänger-abgeleiteten Immunzellen mit Durchflusszytometrie zeigt die Dynamik der phänotypischen und funktionellen Veränderungen dieser Zellen während der Antitumor-Immunantwort.

Tumortransplantation zur Beurteilung der Dynamik tumorinfiltrierender CD8+ T-Zellen in Mäusen

Dieser Artikel beschreibt einen Workflow von Techniken, die zum Testen neuartiger Kandidatenmediatoren von Melanommetastasen und deren Wirkmechanismus eingesetzt werden.

Eine robuste Entdeckungsplattform zur Identifizierung neuartiger Mediatoren der Melanommetastasierung

Das Protokoll stellt ein Krebsimmuntherapiemodell mit zellbasierter Tumorimpfung mit Flt3L-exprimierendem B16-F10-Melanom vor. Dieses Protokoll demonstriert die Verfahren, einschließlich der Vorbereitung kultivierter Tumorzellen, der Tumorimplantation, der Zellbestrahlung, der Messung des Tumorwachstums, der Isolierung intratumoraler Immunzellen und der Durchflusszytometrieanalyse.

Experimentelles Melanom-Immuntherapiemodell mit Tumorimpfung mit einem hämatopoetischen Zytokin

Dieses Protokoll beschreibt die orthotope Implantation von patienteneigenen Krebszellen in die Blinddarmwand von immundefizienten Mäusen. Das Modell rekapituliert fortgeschrittene metastasierende Darmkrebserkrankungen und ermöglicht die Evaluierung neuer therapeutischer Medikamente in einem klinisch relevanten Szenario von Lungen- und Lebermetastasen.

Orthotope Implantation von patienteneigenen Krebszellen in Mäusen rekapituliert fortgeschrittenen Darmkrebs

Das hier vorgestellte experimentelle Design bietet ein nützliches Reproduktionsmodell für die Untersuchung von antigenspezifischen CD8+ T-Zellen während der Metastasierung von Lymphknoten (LN), das die Störung von CD8+ T-Zellen ausschließt.

Modell der drainierenden Lymphknotenmetastasierung zur Beurteilung der Dynamik antigenspezifischer CD8+ T-Zellen während der Tumorentstehung

Wir beschreiben eine Methode, um tumorinfiltrierende Lymphozyten (TILs) von Mäusen mittels Durchflusszytometrie für den adoptiven Zelltransfer zu nutzen. Dieses Protokoll zielt darauf ab, die spezifische Zytotoxizität von TILs gegen Tumore in einem syngenen Pankreaskarzinom-Mausmodell zu verifizieren und Einblicke in die Entwicklung adoptiver Zelltherapien für Bauchspeicheldrüsenkrebs zu geben.

Durchflusszytometrie-basierte Isolierung und therapeutische Bewertung von tumorinfiltrierenden Lymphozyten in einem Mausmodell für Bauchspeicheldrüsenkrebs

Erfahren Sie die adoptive CTL-Transfer-Immuntherapie bei Lungenmetastasen in Mäusen. Diese Methode ermöglicht die quantitative Analyse von Tumor-T-Zell-Interaktionen in vivo.

Experimentelle Metastasierung und CTL adoptiven Transfer Immuntherapie Maus-Modell

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