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Nehmen Sie ein Deckglas mit einer photoabbaubaren Hydrogelschicht, die eingeschlossene Bakterienkolonien enthält, die genetisch so verändert wurden, dass sie Fluoreszenz emittieren.
Legen Sie das Deckglas in eine Halterung.
Fügen Sie Medien hinzu, um eine Austrocknung der Probe zu verhindern.
Konzentrieren Sie sich unter einem Hellfeldmikroskop auf eine einzelne Kolonie von Interesse.
Entwerfen Sie mit geeigneter Software ein Lichtmuster für die Zellextraktion an der Peripherie der Kolonie, um die strukturellen Bindungen des Hydrogels aufzubrechen und die UV-Exposition der Zellen zu minimieren.
Passen Sie die Intensität des UV-Lichts und die Belichtungsdauer an.
Initiieren Sie die UV-Licht-Exposition, um die strukturellen Bindungen im Hydrogel an den exponierten Stellen aufzubrechen, die die Freisetzung der Zielkolonie erleichtern.
Identifizieren Sie die Kolonie mit einem Fluoreszenzfilter.
Platzieren Sie eine Schlauchspitze an der Stelle, wobei das andere Ende mit einer Spritze verbunden ist.
Wechseln Sie in den Hellfeldmodus und saugen Sie mit der Spritze die freigesetzte Kolonie ab.
Übertragen Sie das Volk zur weiteren Analyse in ein Röhrchen.
Legen Sie die Probe in einen PDMS-Halter und geben Sie das definierte Medium auf die Probe, um eine Austrocknung der Probe zu verhindern und eine Trägerlösung für freigesetzte Zellen bereitzustellen. Nachdem Sie den Kalibrierspiegel in Position gebracht haben, stellen Sie den Mikroskopfokus ein, um ein scharfes Bild der Kolonien innerhalb des Hydrogel- oder Mikrotiter-Arrays zu erhalten, und untersuchen Sie, um Kolonien oder Vertiefungen von Interesse zu identifizieren.
Entwerfen Sie hier die Lichtmuster, während die Kameraansicht die Kolonien innerhalb der Probe zeigt, um verschiedene Muster für die Zellextraktion zu testen und das definierte Muster zu speichern. Wählen Sie dann den Abschnitt Sitzungssteuerung aus und fügen Sie die gespeicherte Sequenz unter der Registerkarte mit dem Produktnamen des gemusterten Beleuchtungswerkzeugs hinzu. Wählen Sie die Option zum Stimulieren des Musters, um den gewünschten Belichtungsort anzuzeigen und anzupassen.
Stellen Sie anschließend unter der Registerkarte LED-Steuerung die Lichtintensität auf 60 % und die Belichtungszeit auf 40 Sekunden ein und starten Sie den Belichtungsvorgang. Überwachen Sie den Hydrogelabbau in Echtzeit und im Hellfeldmodus, um die Zellfreisetzung sicherzustellen. Um die freigesetzte Zelle zu sammeln, ändern Sie den Mikroskopfilter von Hellfeld auf TRITC, um den belichteten Bereich der Probe mit bloßem Auge sichtbar zu machen.
Sobald sich der belichtete Bereich lokalisiert hat, platzieren Sie das Ende des Schlauchs auf der bestrahlten Stelle und schalten Sie dann den Mikroskopfilter wieder auf Hellfeld um, um die Zellentnahme in Echtzeit zu überwachen. Verwenden Sie die Spritze, die am anderen Ende des Schlauchs befestigt ist, um vorsichtig 200 Mikroliter Lösung mit den freigesetzten Zellen zu entnehmen und die Lösung zur DNA-Analyse oder Beschichtung in ein 1,5-Millimeter-Zentrifugenröhrchen zu überführen