Beurteilung der bakteriellen Beweglichkeit mit einem mikrofluidischen Gerät

Nehmen wir ein mikrofluidisches Gerät, das aus einem Einlassrohr besteht, das mit einer mikrofluidischen Kammer aus porösen Kanälen für die bakterielle Bewegung verbunden ist.

Die Kammer ist mit einer Beobachtungskammer verbunden, die über ein Auslassrohr an eine Spritzenpumpe angeschlossen ist.

Sättige die Kammern mit einem Puffer, um Luftblasen zu entfernen.

Stellen Sie das Gerät auf die Mikroskopbühne und positionieren Sie das Objektivobjektiv über der Beobachtungskammer.

Stellen Sie die Mikroskopeinstellungen so ein, dass einzelne Bakterienzellen klar sichtbar werden.

Stecken Sie den Einlassschlauch in eine Suspension mit fluoreszierend gekennzeichneten Bakterien.

Starte den Fluss, um Bakterien in die mikrofluidische Kammer zu ziehen, wo sie durch die porösen Kanäle zur Beobachtungskammer gelangen.

Stellen Sie sich die Beobachtungskammer in regelmäßigen Abständen vor.

Erzeugen Sie eine Durchbruchkurve, die den Anteil der Bakterien darstellt, die im Laufe der Zeit durch die poröse Matrix gelangen.

Entferne das Mikrofluidikum aus dem Vakuum und stelle es auf die Mikroskopstufe. Benutze die Spritzenpumpe, um es mit Motilitätspuffer zu sättigen.

Mit Brightfield-Mikroskopie oder Phasenkontrast wird die Vergrößerung so angepasst, dass einzelne bakterielle Zellen sichtbar werden und sich auf das Zentrum des Beobachtungskanals konzentriert. Stelle die Lichtwegeinstellungen auf Fluoreszenzmikroskopie um. Stellen Sie den Fokus durch einen Offset und die Belichtungszeit der Kamera an, um einzelne Bakterienzellen aufzulösen, in diesem Fall 100 Millisekunden.

Als Nächstes wird das Einlassrohr in ein Zwei-Milliliter-Rohr mit der bakteriellen Suspension eingeführt. Drehen Sie die Pumpenrichtung um und beginnen Sie, die Federung mit einer Durchflussrate von einem Mikroliter pro Minute abzuziehen.

Scannen Sie den Querschnitt des gesamten Beobachtungskanals und nehmen Sie jede Minute ein Bild auf.