Live-Bildgebung von Wirts-Pathogen-Interaktionen in Zebrafisch-Embryonen, die mit Mycobacterium abscessus infiziert sind,

Beginnen Sie mit betäubten, transparenten, transgenen Zebrafisch-Embryonen, die fluoreszierend markierte Makrophagen exprimieren.

Die Embryonen werden mit fluoreszierend markiertem Mycobacterium abscessus Rough Strain vorab in den Schwanzmuskel injiziert, um eine lokale Infektion auszulösen.

Das Fehlen von Oberflächenglycopeptidolipiden in diesen Bakterien fördert deren Aggregation.

Immobilisieren Sie die Embryonen in Agarose mit niedrigem Schmelzpunkt und orientieren Sie sie so, dass die Infektionsstelle freigelegt wird.

Sobald die Agarose erstarrt ist, fügen Sie Fischwasser mit einem Anästhetikum hinzu, um die Anästhesie zu erhalten und Dehydrierung zu verhindern.

Überwachen Sie die Infektion in Echtzeit mittels Fluoreszenzmikroskopie.

Nach der Infektion wandern endogene Makrophagen zu den Bakterien und phagozytieren einzelne Zellen.

Einige Bakterien bilden jedoch Kordeln – verlängerte extrazelluläre Aggregate, die sich replizieren, sich ausbreiten und der Phagozytose widerstehen, was zum Zelltod des Wirts und zur Immuninfiltration führt.

Trotzdem gelingt es den Immunzellen nicht, die Schnüre zu beseitigen, sodass sich Bakterien und tote Wirtszellen ansammeln und einen Abszess bilden können.

Dies zeigt die Kordel als Schlüssel-M. Abszess-Immunausweichstrategie .

Für die Live-Bildgebung der M. abscessus-Infektion werden tricain-anästhesierte Embryonen in 1 % Agarose mit niedrigem Schmelzpunkt in einer 35-Millimeter-Glasboden-Petrischale für ein umgekehrtes Mikroskop oder mit einem einzelnen Karies-Depressionsobjektträger für eine aufrechte konfokale Mikroskopie montiert. Orientieren Sie den Embryo an die gewünschte Position und bedecken Sie die erstarrte Agarose mit Fischwasser mit Tricain. Schließlich wird ein Fluoreszenzmikroskop mit 10-fachem Objektiv oder ein fluoreszenz-konfokales Mikroskop mit 40- oder 63-fachen Objektiven für sequentielle Fluoreszenzaufnahme und Übertragungsbildgebung des Embryos verwendet.