Phagebasierter mikrofluidischer Test zur Erkennung lebensfähiger E. coli in Wasserproben

Beginnen Sie mit einer kontaminierten Wasserprobe, die wahrscheinlich fäkale Coliforme, einschließlich E. coli, enthält.

Führen Sie eine serielle Verdünnung in destilliertem Wasser durch, um Trübung und mikrobielle Belastung zu reduzieren.

Mische die gewünschte verdünnte Probe mit dem Nährmedium und fülle sie in einen mikrofluidischen Chip.

Verwenden Sie Vakuumfiltration, um Bakterien auf einer Membran innerhalb des serpentinischen Kanals des Chips einzufangen.

Fügen Sie dem oberen Kammer Nährstoff hinzu und inkubieren Sie, um die bakterielle Erholung zu verbessern.

Ersetzen Sie das Medium durch eine Lösung von E. coli-spezifischen Phagen, die das Luziferase-Gen tragen.

Inkubieren, um eine Phageninfektion zu ermöglichen, bei der sich die Phagen-DNA repliziert, die Wirts-DNA abbaut und neue Phagen bildet sowie Luciferase produziert. Dann lysieren die infizierten Zellen, um die Luciferase freizusetzen.

Wenden Sie Vakuumfiltration an, um die Luziferase auf eine Fangmembran zu übertragen.

Füge ein Substrat hinzu, das mit Luziferase reagiert, um ein leuchtendes Signal zu erzeugen.

Mit einem Photomultiplierrohr misst man die Lumineszenz, die proportional zur Anzahl der lebensfähigen E.-coli-Zellen in der Wasserprobe ist.