JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Krebsforschung
0 Aufrufe • 4:08 Min. • April 30th, 2023
Epithelzelladhäsionsmoleküle (EpCAMs) sind Oberflächentransmembran-Glykoproteine, die in schnell proliferierenden Epithelzellen bei Prostatakrebs überexprimiert werden. Um EpCAM-exprimierende Zellen zu isolieren, beginnen Sie mit einem medizinischen Draht mit einer funktionalisierten, goldbeschichteten Spitze. Funktionalisierungsschichten: ein polymeres Gel, das kovalent gebundene EpCAM-spezifische Antikörper enthält.
Tauchen Sie den Draht in eine periphere Blutsuspension, die fluoreszenzmarkierte Krebszellen enthält. Stellen Sie sicher, dass der funktionalisierte Teil in der Blutsuspension getaucht bleibt. Die EpCAMs auf den Krebszellen erkennen und binden an ihre spezifischen Antikörper, die auf dem Draht funktionalisiert sind.
Mit einem Puffer waschen, um ungebundene Zellen von der Drahtoberfläche zu entfernen. Biegen Sie den Draht und montieren Sie ihn auf einen pufferhaltigen Glasschieber, wobei der funktionalisierte Teil in den Puffer eingetaucht ist. Verwenden Sie ein Fluoreszenzmikroskop, um die helle Fluoreszenz aus dem Zytoplasma und den Zellkernen zu überprüfen und das Vorhandensein von eingefangenen Zellen auf dem Draht zu bestätigen.
Behandeln Sie den Draht mit einem T
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