Einzelzellprobenahme mittels Mikromanipulation: Eine Technik zur Isolierung einzelner Zellen aus Krebszellsuspension

0 Ansichten2:10 Min. • April 30th, 2023

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Die Einzelzellprobenahme ermöglicht die Isolierung einer einzelnen lebenden Zelle aus einer Suspension von Krebszellen für die nachgelagerte Analyse.

Beginnen Sie die Isolierung mit einer Krebszellsuspension. Übertragen Sie das gewünschte Volumen dieser Suspension auf einen Objektträger. Lassen Sie den Objektträger eine Weile ungestört, um die Bewegung der Partikel zu reduzieren und die Zellen absetzen zu lassen.

Übertragen Sie nun den Objektträger unter ein Mikroskop, das mit einem Mikromanipulator ausgestattet ist, der mit einer Mikrokapillarspitze verbunden ist. Dieses hochpräzise Instrument erleichtert die physikalische Interaktion mit Zellen in der Probe auf mikroskopischer Ebene.

Richten Sie die Mikrokapillarspitze in die Nähe einer einzelnen Zielzelle. Sammeln Sie die Zielzelle durch Saugen in die Mikrokapillare. Übertragen Sie nun die Mikrokapillare direkt in ein Röhrchen, das den gewünschten Sammelpuffer enthält.

Werfen Sie den Mikrokapillarinhalt aus, um die eingefangene Einzelzelle in den Puffer freizusetzen. Lagern Sie die isolierte lebende Einzelzelle bis zur weiteren Analyse auf Eis.

Für die Mikromanipulation übertragen Sie die gesamten 100 Mikroliter Zellsuspension auf einen Objektträger. Legen Sie dann den Objektträger auf ein Mikroskop, das mit einem Mikromanipulator ausgestattet ist, und lassen Sie die Zellen 5 Minuten lang ruhen. Anschließend werden 2 Mikroliter des Zelllyse-Mastermixes in 0,2-Milliliter-PCR-Röhrchen pipettiert und auf Eis übertragen. Verwenden Sie den Mikromanipulator, um eine einzelne Zelle in 1 Mikroliter 1X phosphatgepufferter Kochsalzlösung zu sammeln.

Übertragen Sie dann die Zelle direkt in 2 Mikroliter Zelllyse-Mastermix. Verwenden Sie eine Desktop-Mikrofuge, um die Proben schnell 3 Sekunden lang bei 2000 x g herunterzuschleudern, um die Flüssigkeit am Boden des Röhrchens zu sammeln.

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Zuletzt aktualisiert: 1 August 2026