Einzelzellprobenahme mittels Mikromanipulation: Eine Technik zur Isolierung einzelner Zellen aus Krebszellsuspension

Die Einzelzellprobenahme ermöglicht die Isolierung einer einzelnen lebenden Zelle aus einer Suspension von Krebszellen für die nachgelagerte Analyse.

Beginnen Sie die Isolierung mit einer Krebszellsuspension. Übertragen Sie das gewünschte Volumen dieser Suspension auf einen Objektträger. Lassen Sie den Objektträger eine Weile ungestört, um die Bewegung der Partikel zu reduzieren und die Zellen absetzen zu lassen.

Übertragen Sie nun den Objektträger unter ein Mikroskop, das mit einem Mikromanipulator ausgestattet ist, der mit einer Mikrokapillarspitze verbunden ist. Dieses hochpräzise Instrument erleichtert die physikalische Interaktion mit Zellen in der Probe auf mikroskopischer Ebene.

Richten Sie die Mikrokapillarspitze in die Nähe einer einzelnen Zielzelle. Sammeln Sie die Zielzelle durch Saugen in die Mikrokapillare. Übertragen Sie nun die Mikrokapillare direkt in ein Röhrchen, das den gewünschten Sammelpuffer enthält.

Werfen Sie den Mikrokapillarinhalt aus, um die eingefangene Einzelzelle in den Puffer freizusetzen. Lagern Sie die isolierte lebende Einzelzelle bis zur weiteren Analyse auf Eis.

Für die Mikromanipulation übertragen Sie die gesamten 100 Mikroliter Zellsuspension auf einen Objektträger. Legen Sie dann den Objektträger auf ein Mikroskop, das mit einem Mikromanipulator ausgestattet ist, und lassen Sie die Zellen 5 Minuten lang ruhen. Anschließend werden 2 Mikroliter des Zelllyse-Mastermixes in 0,2-Milliliter-PCR-Röhrchen pipettiert und auf Eis übertragen. Verwenden Sie den Mikromanipulator, um eine einzelne Zelle in 1 Mikroliter 1X phosphatgepufferter Kochsalzlösung zu sammeln.

Übertragen Sie dann die Zelle direkt in 2 Mikroliter Zelllyse-Mastermix. Verwenden Sie eine Desktop-Mikrofuge, um die Proben schnell 3 Sekunden lang bei 2000 x g herunterzuschleudern, um die Flüssigkeit am Boden des Röhrchens zu sammeln.

• Single-Cell Isolation - The process of isolating a single live cell from a suspension of cancer cells for detailed analysis.
• Micromanipulation - A technique involving the physical interaction with cells at a microscopic level using a precision micromanipulator.
• Micromanipulator - A high-precision instrument used for manipulating cells or cell components.
• Microcapillary Tip - The part of the micromanipulator used for applying suction and collecting the target cell.
• Cell Suspension - A fluid containing dispersed individual cells.

• Introduce Single-Cell Isolation - a key technique for cancer cell research and diagnosis (e.g., Single-Cell Isolation)
• Outline Micromanipulation - the method involves precise manipulation of cells using a high-precision micromanipulator (e.g., micromanipulation).
• Explain underlying mechanisms - A microcapillary tip is used for targeting and suctioning an individual cell (e.g., microcapillary tip).
• Connect to Experiment - This technique is essential for isolation and further analysis of cancer cells.

• What is single-cell isolation and how to isolate single cells?
• What is micromanipulation and how does it aid in single-cell isolation?
• What is a micromanipulator and how does it work in isolating single cells?

• Practical Applications - Single-cell isolation is crucial in cancer research and diagnosis (e.g., healthcare).
• Industry Impact - This technique is highly relevant in the medical and biological research sectors (e.g., healthcare industry).
• Societal Importance - Advances in these techniques can lead to significant breakthroughs in cancer treatment (e.g., societal health).
• Link to Scientific Advancements - Single-cell analysis provides deeper understanding of cellular behaviors and disease progression.