Einzelzellprobenahme mittels Laser-Capture-Mikrodissektion: Eine Technik zur Gewinnung von Zielzellen aus einer heterogenen Zellpopulation

Die Laser-Capture-Mikrodissektion hilft bei der Gewinnung einer einzelnen Zielzelle aus einer Zellmischung, die auf einem Objektträger vorbereitet wurde. Beginnen Sie damit, einen geeigneten Objektträger auf seiner Oberfläche zu nehmen, der mit einer UV-durchlässigen, biochemisch inerten Membran beschichtet ist. Setzen Sie den Objektträger UV-Licht aus, um ihn hydrophiler zu machen und die Zellhaftung zu verbessern.

Bauen Sie den Objektträger in ein Zytozentrifugengerät ein und geben Sie die Zellsuspension auf den Trichteranschluss des Geräts. Zytozentrifuge, damit die Zentrifugalkraft eine Monoschicht von Zellen auf einer kleinen Fläche auf dem Objektträger konzentrieren und abscheiden kann. Lassen Sie die Folie an der Luft trocknen.

Legen Sie den Objektträger mit der Probenseite nach oben unter ein Laser-Mikrodissektionsmikroskop. Definieren Sie den Bereich, der die interessierende Zelle umgibt. Fokussieren Sie nun den Laserstrahl, um die Zielzelle-haltige Region zusammen mit der Membranbeschichtung zu zerlegen. Defokussieren Sie anschließend den Laserstrahl und pulsieren ihn, um Druck zu erzeugen. Diese Energie katapultiert den mikropräparierten Bereich in den umgekehrten Deckel eines vormontierten Sammelröhrchens, das einen Puffer enthält, der über dem Objektträger platziert ist.

Nehmen Sie das Röhrchen heraus und schließen Sie die Kappe. Drehen Sie das Röhrchen, um den Puffer mit der einzelnen Zielzelle zum Röhrchenboden zu bringen. Kühlen Sie das Röhrchen bis zur weiteren Analyse.

Für die Laser-Mikrodissektion werden die gesamten 300 Mikroliter Zellsuspension 5 Minuten lang bei 300 x g auf einen membranbeschichteten Objektträger zyzentrifugiert. Legen Sie dann den membranbeschichteten Objektträger auf ein Mikroskop, das in der Lage ist, die Mikrodissektion zu lasern. Pipettieren Sie anschließend 4,5 Mikroliter des Zelllyse-Mastermixes in den Deckel des 0,2-Milliliter-PCR-Röhrchens.

Setzen Sie die Kappe über die Probe und entnehmen Sie eine einzelne Zelle durch Lasermikrodissektion. Prüfen Sie direkt danach, ob sich in der PCR-Kappe isolierte Zellen befinden. Nehmen Sie das PCR-Röhrchen aus dem Laser-Mikrodissektionsmikroskop und schließen Sie das Röhrchen. Sammle die gesamte Flüssigkeit am Boden des Röhrchens mit einer kurzen Drehung.

• Microdissection - The process of extracting a single cell from a mixed cell population.
• Cytocentrifuge Technique - A method which uses centrifugal force to focus cells onto a slide.
• Target Capture - The retrieval of a specific designated cell from a slide.
• Laser Capture Microdissection Microscope - An instrument purposed to select and extract a target cell from a tissue section.
• Cytocentrifugation Meaning - The connotation of concentrating and depositing cells on a slide using centrifugal force.

• The concept of microdissection entails selecting and isolating a specific cell from a mix (e.g., target capture).
• Cytocentrifuge technique is a process employing centrifugal force to deposit cells on a slide (e.g., cytocentrifugation).
• Laser capture microdissection microscope allows for precise selection and extraction of target cells (e.g., microdissection).
• In context with the experiment, these principles are implemented to isolate a single target cell on a slide for further analysis.

• What does microdissection entail and what role does target capture play in it?
• From the provided information, can you explain the cytocentrifuge technique?
• What is the use of a laser capture microdissection microscope in the process?

• Microdissection has practical applications in cell study and genome research (e.g., biotechnology).
• These techniques contribute to the clinical and research aspects of healthcare industry (e.g., pathology).
• Isolation of specific cells has broader implications for disease understanding and treatment (e.g., cancer research).
• Advancements in efficient cell isolation techniques drive scientific innovation in cell and genome studies.