Einzelzellprobenahme mittels Laser-Capture-Mikrodissektion: Eine Technik zur Gewinnung von Zielzellen aus einer heterogenen Zellpopulation
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Krebsforschung
0 Aufrufe • 2:30 Min. • April 30th, 2023
Die Laser-Capture-Mikrodissektion hilft bei der Gewinnung einer einzelnen Zielzelle aus einer Zellmischung, die auf einem Objektträger vorbereitet wurde. Beginnen Sie damit, einen geeigneten Objektträger auf seiner Oberfläche zu nehmen, der mit einer UV-durchlässigen, biochemisch inerten Membran beschichtet ist. Setzen Sie den Objektträger UV-Licht aus, um ihn hydrophiler zu machen und die Zellhaftung zu verbessern.
Bauen Sie den Objektträger in ein Zytozentrifugengerät ein und geben Sie die Zellsuspension auf den Trichteranschluss des Geräts. Zytozentrifuge, damit die Zentrifugalkraft eine Monoschicht von Zellen auf einer kleinen Fläche auf dem Objektträger konzentrieren und abscheiden kann. Lassen Sie die Folie an der Luft trocknen.
Legen Sie den Objektträger mit der Probenseite nach oben unter ein Laser-Mikrodissektionsmikroskop. Definieren Sie den Bereich, der die interessierende Zelle umgibt. Fokussieren Sie nun den Laserstrahl, um die Zielzelle-haltige Region zusammen mit der Membranbeschichtung zu zerlegen. Defokussieren Sie anschließend den Laserstrahl und pulsieren ihn, um Druck zu erzeugen. Diese Energie katapultiert den mikropräparierten Bereich in den umgekehrten Deckel
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