Modellierung von Prostatakrebs in gentechnisch veränderten Mausmodellen: Eine CRISPR/Cas9-vermittelte lokalisierte Gen-Editing-Technik in vorderen Prostatalappenzellen der Maus

Beginnen Sie mit einem anästhesierten und präparierten CRISPR/Cas9-Knock-in-Mausmodell mit einem Genom, das so verändert wurde, dass es Cas9-Endonukleasen und grün fluoreszierende Proteine (GFPs) durch einen starken vorgeschalteten Promotor exprimiert. Eine floxierte STOP-Kassette oder LSL, die unmittelbar stromabwärts des Promotors eingefügt wird, blockiert unter normalen Bedingungen die Cas9- und GFP-Transkription.

Schnitten Sie die Bauchdecke der Maus ein, um den vorderen Prostatalappen freizulegen, der mit der Samenblase verbunden ist. Injizieren Sie die gewünschte adenovirale Suspension in den Frontlappen, um die gezielte Verabreichung des viralen Genoms in die Zellen zu erleichtern. Legen Sie den Prostatalappen wieder in die Bauchhöhle und nähen Sie den Schnitt.

In virusinfizierten Zellen exprimiert das virale Genom Cre-Rekombinase-Enzyme und Guide-RNAs, die auf das zu mutierende Gen abzielen. Die Cre-Enzyme erkennen die LSL-Kassette und entfernen den gefloxten Transkriptionsblocker. Dieser Schritt ermöglicht es dem Promotor, die Expression von Cas9-Endonukleasen und GFPs zu steuern.

Anschließend

bilden Cas9-Endonukleasen Komplexe mit viruskodierten Guide-RNAs, die diese Komp