Magnetofektion-basierte Transfektion in vitro: Eine magnetfeldgestützte Technik zur Verabreichung von Plasmiden in primäre neuronale Zellen der Maus mit magnetischen Nanopartikeln
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 3:43 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit fluoreszierender Protein-kodierender Plasmid-DNA oder pDNA-Suspension in Medien. Biokompatible, mit kationischen Polymeren beschichtete magnetische Nanopartikel zur pDNA-Suspension hinzufügen und inkubieren.
Die positiv geladenen kationischen Polymere interagieren und konjugieren elektrostatisch mit negativ geladener pDNA, was zu einer pDNA-Kondensation und der Bildung von "magnetischen Polyplexen" mit einer insgesamt positiven Ladung führt.
Übertragen Sie nun die Polyplex-Mischung in eine Multi-Well-Platte, die adhärente primäre neuronale Mauszellkultur enthält. Montieren Sie die Multiwell-Platte über einer Magnetplatte und inkubieren Sie.
Das von der Magnetplatte erzeugte Magnetfeld bewirkt, dass die Polyplexe sedimentieren und sich auf der neuronalen Zelloberfläche ansammeln. Dieser enge Kontakt mit der Zelloberfläche erleichtert die unspezifische Bindung von positiv geladenen Polyplexen an negativ geladene Zellmembran-assoziierte Proteoglykane.
Anschließend werden die Polyplexe durch Endozytose internalisiert - ein Prozess, bei dem die lokalen Regionen der Zellmembran einstülpen und abklemmen, um membrangebundene Vesikel, sogenannte Endosomen, zu bilden.
Im Inn
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