Generierung eines Mausmodells für experimentelle zerebrale Malaria unter Verwendung von Sporozoiten aus der Wirtsmücke

Beginnen Sie mit einer Röhre mit Speicheldrüsen von weiblichen Mücken, die mit Plasmodium berghei infiziert sind – einem Malaria verursachenden Parasiten.

Zerstören Sie mechanisch die Drüsen und setzen Sie die Sporozoiten – eine infektiöse Form des Parasiten – in das Medium frei.

Pelletieren Sie die Stopfbuchsenfraktionen und Ablagerungen. Sammeln Sie den sporozoithaltigen Überstand und injizieren Sie ihn in die Schwanzvene einer gefesselten Maus.

Die injizierten Sporozoiten wandern durch den Blutkreislauf und erreichen die Leber, wo sie Hepatozyten infizieren und sich vermehren, wobei sie Merozoiten bilden – eine invasive Form des Parasiten.

Im Laufe der Zeit geben Hepatozyten Merozoiten in den Blutkreislauf ab und dringen in die roten Blutkörperchen oder Erythrozyten ein.

Im Inneren der Erythrozyten vermehren sich die Merozoiten asexuell, entwickeln sich zu einer reifen Form und exprimieren von Parasiten abgeleitete Antigene auf der Oberfläche der Erythrozyten.

Diese Antigene binden an endotheliale Rezeptoren, einschließlich derjenigen in den Blutgefäßen des Gehirns, was zur Sequestrierung von infizierten und nicht infizierten Erythrozyten führt.

Diese abnormale Ansammlung von Erythrozyten stört die Blut-Hirn-Schranke, was zu einer Flüssigkeitsansammlung im Parenchym des Gehirns führt und bei der Maus zu zerebraler Malaria führt.

Beginnen Sie damit, weibliche Mücken 17 bis 22 Tage nach der Blutmahlzeit aus ihrem Käfig zu sammeln. Platzieren Sie mit einer Pinzette 3 bis 4 Mücken auf einem Glasobjektträger, der mit einem Tropfen kaltem RPMI-Medium bedeckt ist. Legen Sie dann den Objektträger unter ein Mikroskop.

Dehnen Sie die Mücke vorsichtig mit einer Pinzette zwischen Kopf und Körper und isolieren Sie die Speicheldrüse mit einer Spritze und einer Nadel. Sammeln Sie als Nächstes die Speicheldrüsen aus dem Objektträger, indem Sie sie mit einer Glaspipette aufsaugen und in ein 1,5-Milliliter-Zentrifugenröhrchen geben. Verwenden Sie dann ein kleines Plastikstäbchen, um die isolierten Speicheldrüsen im Zentrifugenröhrchen drei Minuten lang zu zerschlagen, um die Sporozoiten aus dem Speicheldrüsengewebe zu isolieren.

Zentrifugieren Sie drei Minuten lang bei 1.000 mal g bei 4 Grad Celsius, um die Sporozoiten vom restlichen Gewebe zu reinigen. Pipettieren Sie den Überstand, der die Sporozoiten enthält, in ein neues Zentrifugenröhrchen und zählen Sie die gereinigten Sporozoiten in einem Neubauer-Hämozytometer. Sporozoiten zeigen eine typische Bewegung gegen den Uhrzeigersinn.

Als nächstes wird die Konzentration der gereinigten Sporozoiten durch Zugabe von phosphatgepufferter Kochsalzlösung auf 10.000 pro Milliliter eingestellt. Setzen Sie zum Schluss eine C57BL6-Maus in eine Fessel und halten Sie ihren Schwanz in warmes Wasser, um die Schwanzvene besser sichtbar zu machen. Injizieren Sie dann insgesamt 1.000 Sporozoiten oder 0,1 Milliliter in die Schwanzvene, um die Infektion einzuleiten.