Bewertung der Zytotoxizität und Membranintegrität in Lungenschnitten mittels Laktatdehydrogenase-Assay

Beginnen Sie mit menschlichen, präzisionsgeschnittenen Lungenschnitten, PCLS, die mit zytotoxischen Wirkstoffen wie Tensidmolekülen in einer Multiwell-Platte behandelt werden.

Das Tensid fügt sich in die Lipiddoppelschicht der Zelle ein, wodurch die hydrophoben Schwänze des Tensids mit dem hydrophoben Kern der Lipiddoppelschicht interagieren.

Dadurch wird die geordnete Anordnung der Lipidmoleküle gestört, was zur Bildung einer Mizelle führt.

Dies beeinträchtigt die Integrität der Membran und führt zum Austreten von intrazellulärem Inhalt, einschließlich Laktatdehydrogenase oder LDH, einem häufigen Indikator für Zellmembranschäden.

Sammeln Sie den Überstand mit dem freigesetzten LDH.

Fügen Sie den LDH-Assay-Reaktionscocktail hinzu, der Laktatsubstrat, NAD+, Diaphorase und Tetrazoliumsalz enthält, und inkubieren Sie.

LDH oxidiert Laktat zu Pyruvat bei gleichzeitiger Reduktion von NAD+-Coenzym zu NADH.

Diaphorase nutzt das NADH, um das Tetrazoliumsalz in Formazan zu reduzieren – ein farbiges Produkt.

Die Tensid-induzierte Zytotoxizität kann anhand der LDH-Aktivität gemessen werden, die durch die Formazanproduktion angezeigt wird.

Nach der Inkubation des PCLS mit oder ohne Testmittel w