JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:49 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Multiwell-Platte mit Filtern an der Basis.
Fügen Sie eine Testprobe hinzu, die verschiedene Zytokine enthält.
Fügen Sie verschiedene Sätze von Mikrosphären hinzu, die sich nach Größe und interner Fluoreszenzintensität unterscheiden.
Jedes Set ist an einen Antikörper konjugiert, der auf ein bestimmtes Zytokin abzielt.
Inkubieren Sie die Platte im Dunkeln unter Rühren.
Die Antikörper binden an ihre Zielzytokine und immobilisieren sie auf den Mikrosphären.
Wenden Sie ein Vakuum an, um die ungebundenen Zytokine zu entfernen. Mikrosphärengebundene Zytokine bleiben aufgrund der kleineren Porengröße der Membran erhalten.
Fügen Sie einen Cocktail aus Biotin-konjugierten Nachweisantikörpern hinzu, die an die Mikrosphären-gebundenen Zytokine binden.
Fügen Sie ein fluoreszierendes Reporter-konjugiertes Streptavidin hinzu und inkubieren Sie im Dunkeln unter Rühren. Streptavidin bindet an Biotin und immobilisiert den Reporter auf dem Mikrosphärenkomplex.
Entfernen Sie ungebundene Moleküle und resuspendieren Sie die Mikrosphären.
Identifizieren Sie mit Hilfe der Durchflusszytometrie die gebundenen Zytokine, indem Sie die Größe und die innere Fluoreszenz der Mikrosphären bestimmen
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