Eine Multiplex-Immunfärbemethode unter Verwendung von Primärantikörpern derselben Wirtsspezies
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Immunologie
0 Aufrufe • 5:31 Min. • July 8th, 2025
Es wird ein fixierter und permeabilisierter Nebennierenschnitt genommen, der aus einer Rinde und einer Medulla besteht. Behandeln Sie es mit einem siedenden sauren Puffer, indem Sie die fixierungsinduzierten Vernetzungen für die Antigen-Demaskierung aufbrechen.
Blockieren Sie die unspezifischen Bindungsstellen und führen Sie primäre Antikörper ein, die an Cortex-spezifische Marker binden.
Biotinylierte Sekundärantikörper werden hinzugefügt, die auf die Primärantikörper und Streptavidin-konjugierte Peroxidasen abzielen, die an Biotin binden.
Führen Sie ein mit Fluorophor markiertes Tyramid und Wasserstoffperoxid ein.
Die immobilisierten Peroxidasen verwenden Wasserstoffperoxid, um Tyramid zu aktivieren, das an nahe gelegene Proteine bindet und den Kortex markiert.
Behandeln Sie anschließend den Abschnitt mit dem Siedepuffer, um die gebundenen Antikörper zu entfernen.
Einführung der gleichen von der Wirtsspezies erzeugten Primärantikörper, die auf Medulla-spezifische Marker und biotinylierte Sekundärantikörper abzielen.
Führen Sie Streptavidin-konjugierte Peroxidasen und ein anderes Fluorophor-konjugiertes Tyramid ein, um das Mark zu markieren.
Das Entfernen der Cortex-spezifischen P
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