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DOI: 10.3791/52551-v
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Dieser Videoartikel veranschaulicht ein umfassendes Protokoll zum Nachweis und zur Quantifizierung aller Stadien der adulten Hippocampus-Neurogenese innerhalb desselben Gewebeabschnitts. Wir haben eine Methode entwickelt, um die Einschränkungen der indirekten multiplen Immunfluoreszenz zu überwinden, die entstehen, wenn geeignete Antikörper von verschiedenen Wirtsspezies nicht verfügbar sind.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Einschränkungen der indirekten Immunfluoreszenz zu umgehen, um neurale Vorläuferzellen zu untersuchen. Wenn geeignete Primärantikörper von verschiedenen Wirtsspezies nicht verfügbar sind. Zunächst wird ein Thymidin-Analogon injiziert, um die sich teilenden Zellen zu markieren, wonach das Gewebe geerntet, verarbeitet und in Kryoschnitte geschnitten wird.
Dann wird zu Beginn eine sequentielle multiple Immunfluoreszenz durchgeführt. Dabei wird ein unmarkierter Primärantikörper appliziert, der dann an einen fluoreszenzmarkierten Sekundärantikörper gebunden wird. Als nächstes werden die offenen Perikopen auf dem ersten Sekundärantikörper mit Serum der Primärantikörperspezies blockiert, und alle Immunglobuline, die vom zweiten Sekundärantikörper erkannt werden könnten, werden mit unkonjugierten Fab-Fragmenten bedeckt.
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