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Immunhistochemie und Multiple Markierung mit Antikörper aus dem gleichen Host Arten, die Adult Ne...
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JoVE Journal Neuroscience
Immunohistochemistry and Multiple Labeling with Antibodies from the Same Host Species to Study Adult Hippocampal Neurogenesis

Immunhistochemie und Multiple Markierung mit Antikörper aus dem gleichen Host Arten, die Adult Neurogenese Studieren

Full Text
27,207 Views
09:24 min
April 22, 2015

DOI: 10.3791/52551-v

Anne Ansorg*1, Katja Bornkessel*1, Otto W. Witte1, Anja Urbach1

1Hans Berger Department of Neurology,Jena University Hospital

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Dieser Videoartikel veranschaulicht ein umfassendes Protokoll zum Nachweis und zur Quantifizierung aller Stadien der adulten Hippocampus-Neurogenese innerhalb desselben Gewebeabschnitts. Wir haben eine Methode entwickelt, um die Einschränkungen der indirekten multiplen Immunfluoreszenz zu überwinden, die entstehen, wenn geeignete Antikörper von verschiedenen Wirtsspezies nicht verfügbar sind.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Einschränkungen der indirekten Immunfluoreszenz zu umgehen, um neurale Vorläuferzellen zu untersuchen. Wenn geeignete Primärantikörper von verschiedenen Wirtsspezies nicht verfügbar sind. Zunächst wird ein Thymidin-Analogon injiziert, um die sich teilenden Zellen zu markieren, wonach das Gewebe geerntet, verarbeitet und in Kryoschnitte geschnitten wird.

Dann wird zu Beginn eine sequentielle multiple Immunfluoreszenz durchgeführt. Dabei wird ein unmarkierter Primärantikörper appliziert, der dann an einen fluoreszenzmarkierten Sekundärantikörper gebunden wird. Als nächstes werden die offenen Perikopen auf dem ersten Sekundärantikörper mit Serum der Primärantikörperspezies blockiert, und alle Immunglobuline, die vom zweiten Sekundärantikörper erkannt werden könnten, werden mit unkonjugierten Fab-Fragmenten bedeckt.

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Neuroscience Ausgabe 98 Immunhistochemie Immunfluoreszenz Antikörper Epitopdemaskierung Thymidinanaloga 5-Chlor-2'-Desoxyuridin (CldU) 5-Iod-2'-Desoxyuridin (IDU) 5-Brom-2'-Desoxyuridin ( BrdU) Gyrus dentatus adulte Neurogenese frei schwebenden Hippocampus-Vorläuferzellen

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