Isolierung sensorischer Neuronen und Co-Kultivierung mit natürlichen Killerzellen

Nehmen Sie ein Spinalganglion oder DRG, eine Ansammlung sensorischer Neuronen, in ein kaltes, serumhaltiges Medium, um die Neuronen während der nachfolgenden Verarbeitung zu schützen.

Zentrifuge, dann den Überstand entfernen.

Fügen Sie einen Phosphatpuffer hinzu, der Verdauungsenzyme enthält, und inkubieren Sie unter leichtem Rühren.

Die Enzyme dissoziieren die extrazelluläre Matrix (EZM) und das DRG-Gewebe und lockern die Zellen.

Fügen Sie ein serumhaltiges Medium hinzu, um die Enzyme zu inaktivieren.

Zentrifugieren Sie und entsorgen Sie dann den Überstand.

Resuspendieren Sie das DRG und dissoziieren Sie das Gewebe mechanisch mit immer kleineren Pipetten, um eine Zellsuspension zu erhalten.

Schichten Sie die Zellen auf einen Dichtegradienten aus Rinderserumalbumin.

Zentrifuge. Die Neuronen setzen sich am Boden ab und bilden ein Kügelchen.

Entsorgen Sie die Schichten, die Gewebereste enthalten.

Resuspendieren Sie die Neuronen in einem Kulturmedium.

Geben Sie die Neuronen in eine mit EZM beschichtete Kulturschale und inkubieren Sie.

Entfernen Sie das Medium und fügen Sie natürliche Killer- oder NK-Zellen hinzu.

Fügen Sie ein Medium zur Co-Kultur hinzu und untersuchen Sie die Interak