JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:01 Min. • July 8th, 2025
Nehmen wir transgene Caenorhabditis elegans-Würmer, die auf einem Agarblock wachsen.
Diese Würmer exprimieren einen Kalziumindikator, GCaMP5, und ein Kalzium-unempfindliches fluoreszierendes Protein, mCherry, in Neuronen, die das Eiablageverhalten regulieren.
Montieren Sie die Würmer auf einem inversen Mikroskoptisch.
Visualisieren Sie GCaMP5- und mCherry-Fluoreszenz.
Vor der Freisetzung der Eizellen werden die Neuronen aktiviert und öffnen spannungsgesteuerte Kalziumkanäle, die den Kalziumeinstrom ermöglichen.
Intrazelluläres Kalzium bindet an GCaMP5, verändert dessen Konformation und erhöht die Fluoreszenz.
In der Zwischenzeit bleibt die mCherry-Fluoreszenz unverändert, was die Verfolgung des Neurons ermöglicht.
Die aktivierten Neuronen setzen Neurotransmitter frei, die an bestimmte Muskelrezeptoren binden und die Freisetzung von Eizellen auslösen.
Nach der Freisetzung schließen sich die Kalziumkanäle, wodurch der Kalziumeinstrom und die GCaMP5-Fluoreszenz reduziert werden.
Nehmen Sie als Nächstes Hellfeldbilder auf, um die Bewegung der Wurme zu beobachten.
Eine verminderte Bewegung tritt aufgrund von Muskelkontraktionen vor der Freisetzung der Eizelle auf.
Nach der Freisetzung d
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos