Testen der sensorischen Nervenfunktion in einem operativ denervierten Mausmodell

Beginnen Sie mit einer betäubten Maus mit freiliegender Rückenhaut. Desinfizieren Sie den Bereich und decken Sie ihn ab.

Machen Sie einen Schnitt in der Mittellinie vom Hals bis knapp über dem Schwanz.

Ziehe an der linken Haut, um einen Hautlappen zu erzeugen und das darunter liegende Gewebe freizulegen.

Legen Sie die Maus unter ein Mikroskop und lokalisieren Sie die sensorischen Nerven.

Ziehen Sie vorsichtig an diesen Nerven und entfernen Sie sie, ohne die Blutgefäße zu stören.

Befeuchten Sie das Gewebe und entfernen Sie die verbleibenden Nerven aus dem Hautlappen, wodurch ein enervierter Bereich entsteht.

Lassen Sie auf der rechten Seite die Nerven als Kontrolle intakt. Nähen Sie den Hautschnitt.

Lassen Sie die Maus wiederherstellen.

Um eine stabile Denervierung mehrere Wochen nach der Operation zu beurteilen, verwenden Sie dieselbe denervierte Maus mit rasierter Rückenhaut.

Mit einer Nadel in den Kontrollbereich stechen und so eine mechanische Stimulation erzeugen.

Dadurch werden die darunter liegenden Nerven angeregt, ein Signal an das Gehirn gesendet und die Maus reagiert.

Das Stechen in den denervierten Bereich löst jedoch keine Reaktion aus, was die Rolle der sensorischen Nerven bestätigt.

Betäuben Sie das Tier. Rasieren Sie die gesamte Rückenhaut und reinigen Sie den Bereich ähnlich wie bei der Biopsie. Machen Sie nun mit einem sterilen Skalpell einen Schnitt entlang der dorsalen Mittellinie von der Basis des Halses bis etwa einen halben Zentimeter über dem Schwanz. Reflektieren Sie mit einer sterilen, stumpfen Pinzette die Haut auf der linken Seite sanft von der Flanke weg, um das darunter liegende Gewebe von den Schulterblatt-Fettpolstern in der Nähe des Halses bis knapp über die hintere Extremität sichtbar zu machen.

Identifizieren Sie nun die dorsalen Hautnerven unter einem Präparierlichtmikroskop. Diese erscheinen als weiße Stränge, die kaudal durch die durchscheinende Faszie der Rumpfwand wandern, bevor sie scharfe Kurven machen und in das lose Bindegewebe unter der Haut eindringen. Anschließend werden mit einer ultrafeinen Pinzette die Nerven ausschließlich von der linken Seite des Tieres entfernt, die sich an den anatomischen Stellen T3 bis T12 befinden, indem sie von der Stelle, an der sich ihre Segmente an der Rumpfwand biegen, zu ihren Eintrittsstellen in die Haut gezupft werden.

Richten Sie die Pinzette senkrecht aus und fassen Sie die Nerven etwa einen halben Zentimeter unterhalb ihrer Biegestellen. Sobald Sie ihn gefasst haben, ziehen Sie ihn nach oben, damit sich der Nerv dehnt, und trennen Sie sich vom umgebenden Gewebe, um ihn zu entfernen. Vermeiden Sie es, die angrenzenden Blutgefäße zu beschädigen. Achten Sie darauf, das Gewebe während des gesamten Eingriffs feucht zu halten, indem Sie regelmäßig Tropfen mit 0,9% steriler Kochsalzlösung auftragen.

Entfernen Sie weiterhin alle Nerven, die sich von der Rumpfwand bis zur Haut erstrecken, aber stören Sie nicht die Nerven in der dichten Faszie der Rumpfwand. Entfernen Sie anschließend alle Nerven aus dem freiliegenden Hautlappen. Diese Fasern bestehen aus den distalen Ästen der dorsalen Hautnerven und erscheinen als weiße, verzweigte Stränge, die sporadisch im Bindegewebe auf der dermalen Seite des Hautlappens angeordnet sind.

Um diese feinen Äste zu entfernen, positionieren Sie die Pinzette ungefähr parallel zur Hautoberfläche, fassen Sie die Nerven und zupfen Sie sie nach oben. Entferne auf diese Weise alle sichtbaren Nerven. Durchstechen Sie nicht die Blutgefäße und die Haut.

Bei diesem Schritt ist es wichtig, benachbarte Blutgefäße nicht zu reißen. Wenn Sie einen Nerv mit einem angrenzenden Blutgefäß finden, folgen Sie ihm ventral bis zu einem Bereich, in dem es kein benachbartes Gefäß gibt, und entfernen Sie es durch Zupfen.

Reflektieren Sie nun stumpf die Haut auf der rechten Seite des dorsalen Mittellinienschnitts, aber entfernen Sie keine Nerven. Dies dient als kontralaterale scheinbetriebene Kontrolle. Zum Schluss wird das Tier vernäht und postoperativ wie zuvor überwacht. Später, um den stabilen Nervenverlust Wochen nach der Operation zu bestätigen, stechen Sie vorsichtig mit einer sterilen Injektionsnadel in den denervierten Bereich. Achten Sie darauf, ob das Tier typischerweise mit Schütteln oder Drehen des Kopfes reagiert. Wenn die Hautstelle stabil ennerviert wurde, zeigt das Tier keine oder nur eine geringe Reaktion.