Bestimmung der Störung der Blut-Hirn-Schranke mit Hilfe von Fluoreszenzfarbstoffen in einem EAE-Mausmodell

Beginnen Sie mit einer Lösung, die grünen Fluoreszenzfarbstoff enthält, der an eine große Dextrankette gebunden ist. Fügen Sie dann eine Lösung aus rotem Farbstoff hinzu, die an eine kleine Dextrankette gebunden ist.

Mischen Sie die Farbstoffe gründlich und geben Sie sie in eine Spritze.

Injizieren Sie diese Farbstoffmischung intravenös in eine anästhesierte Maus durch den Sinus retroorbitalis, eine Vene hinter dem Auge.

Diese Maus leidet an experimenteller autoimmuner Enzephalomyelitis oder EAE.

In diesem Zustand ist die Blut-Hirn-Schranke gestört und die Tight Junctions zwischen den Endothelzellen der Blutgefäße des Gehirns sind lückenhaft.

Lassen Sie die Maus vollständig wach werden und ihre Beweglichkeit wiedererlangen, sodass die Farbstoffe zirkulieren können.

Der rote Farbstoff mit der kleinen Dextrankette diffundiert leicht durch die kleinen Lücken in das Hirngewebe, während der grüne Farbstoff, der an die große Dextrankette gebunden ist, bei schweren Schäden diffundiert.

Die Menge der einzelnen Fluoreszenzfarbstoffe im Hirngewebe korreliert mit dem Ausmaß der Störung der Blut-Hirn-Schranke.

Zur Herstellung von Dextran-Stammlösungen lösen Sie 10 Milligramm drei Kilodalton Dextran Texas Red in 500 Mikrolitern 0,9%iger Natriumchloridlösung und 5 Milligramm 10 Kilodalton Dextran AlexaFluor 488 in 250 Mikrolitern 0,9% iger Natriumchloridlösung.

Für die Dextran-Arbeitslösung pipettieren Sie kurz vor der Injektion 55 Mikroliter 10 Kilodalton Dextran AlexaFluor 488 Stammlösung auf ein Stück Siegelfolie und fügen Sie dann 55 Mikroliter drei Kilodalton Dextran Texas Red Stammlösung hinzu. Mischen und sammeln Sie 100 Mikroliter in einer feinen Einwegspritze.

Platzieren Sie als Nächstes eine betäubte Maus in einer seitlichen Position auf dem Tisch. Injizieren Sie intravenös 100 Mikroliter fluoreszierende Tracer in die Maus, bevor die Maus aufwacht. Lassen Sie den Tracer 15 Minuten lang zirkulieren.