DOI: 10.3791/3140-v
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Wir beschreiben ein Protokoll zu den wichtigsten Aufgaben der Host Signalmoleküle in lytische Replikation eines Modells Herpesvirus, gamma Herpesvirus 68 (γHV68) zu identifizieren. Mit Hilfe genetisch veränderter Mauslinien und embryonale Fibroblasten zur γHV68 lytische Replikation, erlaubt das Protokoll sowohl phänotypische Charakterisierung und molekulare Vernehmung von Virus-Wirt-Interaktionen in lytischen Replikation.
Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments ist es, mit verschiedenen virologischen und biochemischen Ansätzen die Rolle eines Wirtssignalwegs bei der lytischen Replikation eines Herpesvirusmodells zu untersuchen. Hier untersuchen wir beispielhaft die Rolle des mitochondrialen antiviralen Signalproteins Mavs während der Infektion mit dem Herpesvirus gamma HV 68. Um die Rolle von Mavs bei akuten Infektionen zu untersuchen, werden Wildtyp- und Mavs-Knockout-Mäuse nach einer akuten Virusinfektion mit gamma HV 68 infiziert.
Die Lunge der Maus wird entnommen und die Viruslast wird durch einen Plaque-Assay bestimmt, bei dem die Proben seriell verdünnt und plattiert werden. Auf Monolayern wird dann die Anzahl der Plaques gezählt. Die erhöhte Viruslast bei den Knockout-Mäusen deutet darauf hin, dass das interessierende Gen eine antivirale Rolle spielt.
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